[发明专利]一种高纯度藻蓝蛋白的制备方法

摘要

本发明公开了一种高纯度藻蓝蛋白的制备方法，其特征在于采用如下步骤：(1)取新鲜螺旋藻粉与磷酸盐缓冲液充分混匀，反复冻融7-10次破除细胞壁，离心除去藻泥，得到上清液；(2)采用20％-30％和40％-60％的硫酸铵两步沉淀法得到藻蓝蛋白粗提物；(3)粗提物透析后上样于弱阴离子交换柱DEAE Sepharose FF，经离子交换后进行梯度洗脱，收集A₆₂₀/A₂₈₀>3的流出组分；(4)收集到的样品透析后上样于强阴离子交换柱SOURCE30Q，经离子交换后进行梯度洗脱，收集A₆₂₀/A₂₈₀>4的流出组分，再经过一次硫酸铵沉淀浓缩，可以得到纯度大于4.5的高纯度藻蓝蛋白。本发明的提取纯化方法，工艺精简，原料螺旋藻来源广泛，所需设备简单，产品纯度高，有很高的应用价值。

主权项

一种高纯度藻蓝蛋白的制备方法，其特征在于：所述方法的步骤包括：(1)将螺旋藻粉与磷酸盐缓冲液按一定比例混合，常温避光搅拌至完全混悬。(2)将步骤(1)中的螺旋藻液反复冻融7‑10次，离心收集上清液。(3)向上述(2)中的上清液中分两步加入硫酸铵固体，硫酸铵饱和浓度分别为20％‑30％和40％‑60％，两步分别离心，第一步离心取上清液，第二步离心取沉淀，所得的沉淀用磷酸盐缓冲液透析除盐，得到藻蓝蛋白粗提液。(4)将上述(3)的藻蓝蛋白粗提液上样于弱阴离子交换柱，进行梯度洗脱，收集A₆₂₀/A₂₈₀>3的流出组分。(5)将上述(4)收集组分透析除盐后，上样于强阴离子交换柱，进行梯度洗脱，收集A₆₂₀/A₂₈₀>4的流出组分。(6)将上述(5)收集组分中加入硫酸铵固体，硫酸铵饱和浓度达到40％，4℃静置8小时以上，离心除去上清液得到藻蓝蛋白沉淀，此沉淀用少量磷酸盐缓冲液溶解透析后得到高纯度藻蓝蛋白。