[发明专利]一种检测气溶胶中牛分枝杆菌与结核分枝杆菌的方法有效
| 申请号： | 201410188964.3 | 申请日： | 2014-05-06 |
| 公开（公告）号： | CN103981260A | 公开（公告）日： | 2014-08-13 |
| 发明（设计）人： | 何洪彬;赵贵民;王洪梅 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院奶牛研究中心 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人： | 彭成 |
| 地址： | 250100 山东省*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种检测气溶胶中牛分枝杆菌与结核分枝杆菌的方法：(1)采集气溶胶样本；(2)提取气溶胶样本的基因组总DNA；(3)检测：进行PCR扩增；(4)建立标准曲线和溶解曲线：建立pEASY-T3-MPB70阳性标准质粒的标准曲线，以及扩增体系的溶解曲线；(5)判断气溶胶样本中是否含有牛分枝杆菌或/和结核分枝杆菌。本发明还公开了特异性引物(如SEQIDNO.1、2所示)以及试剂盒(由特异性引物、pEASY-T3-MPB70阳性标准质粒、SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR试剂和ddH2O组成)。本发明的方法，既可用于养殖场气溶胶中牛分枝杆菌与结核分枝杆菌的检测与鉴定，也可用于临床血液、血清、奶样、组织等样本的检测与鉴定。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 检测 气溶胶 分枝杆菌 结核 方法 | ||
【主权项】：
一种检测气溶胶中牛分枝杆菌与结核分枝杆菌的方法，其特征在于：步骤如下： (1)采集气溶胶样本； (2)提取气溶胶样本的基因组总DNA； (3)检测：以上述提取的基因组总DNA为模板，采用试剂盒进行SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR，具体如下： 所述试剂盒由特异性引物、pEASY‑T3‑MPB70阳性标准质粒、SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR试剂和ddH2O组成； 所述pEASY‑T3‑MPB70阳性标准质粒是由序列为SEQIDNO.3所示的DNA片段与pEASY‑T3载体相连接后得到的重组质粒； 所述特异性引物的序列如下： MPB70‑F：5′‑TGACCAGCATCCTGACCTACC‑3′； MPB70‑R：5′‑CGGCGTTACCGACCTTGA‑3′； (4)建立标准曲线和溶解曲线：建立pEASY‑T3‑MPB70阳性标准质粒的标准曲线，以及扩增体系的溶解曲线； (5)判断：若溶解曲线为S型曲线，则表明气溶胶样本中含有牛分枝杆菌或/和结核分枝杆菌；若溶解曲线为一条直线，则表明气溶胶样本中不含有牛分枝杆菌以及结核分枝杆菌。
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