[发明专利]胡桃楸诱导不定芽的方法

摘要

本发明及一种胡桃楸诱导不定芽的方法，(1)外植体的选择、(2)合子胚消毒、(3)合子胚预培养、(4)不定芽外植体的选择、(5)诱导和分化。本发明简单方便、快速有效，能在短时间内繁殖出大批的组培苗，能够为以后培育出优良无性系植株做好基础，有效地保护和繁殖国家濒危树种存在的危机状态，为今后更进一步保护和利用该物种奠定良好基础。

主权项

一种胡桃楸诱导不定芽的方法，其特征在于：(1)外植体的选择每年8‑10月份采取成熟的胡桃楸种子，经清水洗涤、在阳光下晾晒将胡桃楸外表皮去除掉，放置温度20‑25℃条件下干燥、通风处备用，用锤子将外壳打碎，取胡桃楸种子尖部那端带少量子叶的合子胚，(2)合子胚消毒先用70％乙醇浸润30秒2次，然后用0.1％的升汞HgCl₂溶液消毒15分钟，用无菌水冲洗5‑7次，然后在无菌水中浸泡2‑4小时，备用，(3)合子胚预培养在无菌水中浸2‑7小时后，将消毒后的胡桃楸合子胚外表皮去掉，接种于添加激素吲哚乙酸IBA0.01mg/L的MS培养基中培养，蔗糖30g/L，琼脂6g/L，培养温度24‑26℃，光照时间16h/d，光照强度20001x，培养25‑30天，(4)不定芽外植体的选择待培养后的胡桃楸合子胚基部子叶张开，发育成带不同个数腋芽的小植株后，将胡桃楸植株基部存在的子叶掰掉，用镊子夹紧植株茎段，用无菌剪刀将胡桃楸植株从基部处开始剪成1.0‑2.0cm左右各带不同腋芽的茎段，作为不定芽诱导分化的外植体，(5)诱导和分化将外植体接种在不定芽诱导培养基中，培养基为DKW培养基附加激素6‑苄氨基腺嘌呤(6‑BA)2.0mg/L及IBA0.01mg/L，同时附加腺嘌呤AD10mg/L，蔗糖30g/L，琼脂6g/L，培养温度为25‑27℃、光照时间16h/d，光照强度1000‑2000l x，培养7‑8天后外植体基部切口处边缘出现绿色芽点，培养15‑20天获得诱导丛生芽，丛生芽经过分株后再接种于培养基上培养后获得大量不定芽。