[发明专利]一种结合生长因子型温敏水凝胶生物载体的制备方法

摘要

本发明公开了一种结合生长因子型温敏水凝胶生物载体的制备方法。是以γ-聚谷氨酸(γ-PGA)、牛磺酸、N-异丙基丙烯酰胺(NIPA)为主要原料，N，N-亚甲基双丙烯酰胺(MBAA)为交联剂，过硫酸铵或过硫酸钾为引发剂，N，N，N’，N’-四甲基乙二胺(TEMED)为促进剂。本发明主要采用半互穿网络技术，制备方法包括γ-PGA-S72单体的合成、温敏水凝胶生物载体的制备、温敏水凝胶生物载体的纯化和温敏水凝胶生物载体与生长因子的结合四个步骤。本发明的原料来源丰富、制备方法简单。本发明的结合生长因子型温敏水凝胶具有良好的生物相容性，在组织工程支架、生物药物载体、生物粘合剂和创伤敷料等生物医疗领域具有广阔的应用前景。

主权项

一种结合生长因子型温敏水凝胶生物载体的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：1)γ‑PGA‑S72单体的合成：将γ‑聚谷氨酸和牛磺酸在室温下溶解于0.5M碳酸氢钠溶液中，待溶解完全后将反应液置于4℃的冰水浴中冷却降温，待冷却后加入缩合剂EDC·HCl搅拌30min，之后将反应液置于室温搅拌24h，50000分子量透析袋透析，冷冻干燥制得γ‑PGA‑S72单体；2)温敏水凝胶生物载体的制备：将NIPAAm和γ‑PGA‑S72溶解于去离子水中，NIPAAm和γ‑PGA‑S72单体在水溶液中的质量百分比浓度分别为3～5％和2～8％，20～25℃搅拌25～45min至完全溶解，将反应液置于冰水浴中冷却降温至0～4℃，加入质量百分比浓度为2～6％的交联剂搅拌均匀，在N₂保护和磁力搅拌下加入质量百分比浓度为0.5～2％的引发剂水溶液，搅拌5～15min后，向混合液中加入促进剂50～120μL，搅拌30～60s，将溶液缓慢倒入厚度为1.5mm的玻璃器皿中，密封后进行原位自由基聚合反应，控制反应温度在20～25℃，24～48h后停止反应；3)温敏水凝胶生物载体的纯化：将反应后的产物用直径为18mm的打孔器进行打孔，浸泡于去离子水中7～10天，每间隔6～8小时更换去离子水，以除去未完全反应的单体、交联剂和各种杂质，制得所述的温敏水凝胶生物载体；4)温敏水凝胶生物载体与生长因子的结合：将步骤3所得的温敏水凝胶置于体积浓度为75％的酒精中浸泡30min进行灭菌，之后用无菌的PBS溶液浸泡2d除去多余的酒精，将凝胶浸泡于浓度为50ng/ml的含有0.1％BSA的PBS溶液中4℃10h，之后用PBS冲洗3次，制得结合生长因子型温敏水凝胶生物载体。