[发明专利]谷子锈菌巢式PCR高效检测方法

摘要

本发明涉及一种谷子锈菌巢式PCR高效检测方法，利用谷子锈菌IGS区与其它真菌的IGS区的差异位点，设计两对特异性引物Urs1‑F/Urs1‑R和Urs2‑F/Urs2‑R，分别作为巢式PCR扩增的外侧引物对和内侧引物对，以样品DNA为模板进行两轮PCR扩增后对扩增产物进行电泳检测。通过目标片段判定待测病原菌是否为谷子锈菌，或所测谷子叶片是否被谷子锈菌侵染。本发明的方法对病原基因组DNA的检测灵敏度为100pg/μL，特异性强，可用于快速，准确和灵敏的检测谷子叶片中的锈菌，对谷子锈病的早期诊断及防治具有重要意义。

主权项

一种谷子锈菌巢式PCR高效检测方法，其特征在于：利用谷子锈菌两对特异性引物，该特异性引物对由正向外引物、反向外引物、正向内引物和反向内引物组成：正向外引物Urs1‑F：5'‑GCCTCTAAGTCAGAATCCGTGC‑3'；反向外引物Urs1‑R：5'‑GACGGGATGCGGTAAGTTCA‑3'；正向内引物Urs2‑F：5'‑CGTGCATCTTATAAATGTGTCA‑3'；反向内引物Urs2‑R：5'‑AGTGGATCGTAGCAACAAGG‑3'；所述引物分别作为巢式PCR扩增的外侧引物对和内侧引物对，以提取的谷子叶片总DNA为模板进行PCR扩增反应，扩增产物进行电泳检测，若检测到203bp的目标片段，则说明所测样本为被锈菌侵染的谷子，该方法可以排除谷子上其它常见病原菌的干扰，准确检测出谷子植株中的锈菌。