[发明专利]一种鉴别雌核发育草鱼与普通草鱼的方法

摘要

本发明一种鉴别雌核发育草鱼与普通草鱼的方法，提供一种具有多态性高、遗传稳定、检测成功率高、便于广泛使用等优点的分子标记方法，能够快速准确地鉴别雌核发育草鱼与普通草鱼。根据遗传纯合度的差异，从14个SSR标记中筛选出了5个在雌核发育群体与野生群体中扩增稳定、条带清晰、多态性和遗传纯合度差异较大SSR。由于雌核发育群体中遗传纯合度大大提高，SSR在其体内扩增的等位基因数目也会减少。统计分析发现，这5个SSR在普通草鱼体内扩增的实际等位基因数目为8-10个，而在雌核发育草鱼体内扩增的等位基因数目为5-7个，通过比较等位基因数即可鉴别雌核发育草鱼与普通草鱼，其准确率的理论值可达99.92％。

主权项

一种鉴别雌核发育草鱼与普通草鱼的方法，其特征在于其具体步骤如下：(1)取待测草鱼尾鳍，利用酚‑氯仿抽提法提取基因组DNA；(2)以步骤(1)中制得的基因组DNA溶液为模板，用5对微卫星引物对分别进行PCR扩增，制得PCR扩增产物，其中的5对微卫星引物序列如下：AAGGAACAGCATAAACCGAAAT GGAACCAAGCATCTGAAACTGTGTATCAGTAGTAGGCGGTTTA GTGTCGCTACCTCGCTATAAGTGAGACTATGCTGATAAAACCG ATTGAAACAGATGCCTGCTTGCAGACGGATGGATGGATG CTTTCAAAATGTGGAGTCTTGCAAAATCCCAGTGAGACAATC ATCCCATAATGCCTTGC；(3)将步骤(2)的PCR产物用12％的非变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离，10V/cm电泳2h，用硝酸银溶液染色，氢氧化钠显色液显色，拍照记录电泳结果；(4)根据步骤(3)的电泳图谱得到所述5个SSR标记在待测体内扩增的等位基因数，在5‑7个之间则为雌核发育草鱼，在8‑10个之间则为普通草鱼。