[发明专利]利用毕赤酵母高效分泌表达重组猪胰腺脂肪酶PPL的方法无效
| 申请号： | 201410211857.8 | 申请日： | 2014-05-20 |
| 公开（公告）号： | CN103952386A | 公开（公告）日： | 2014-07-30 |
| 发明（设计）人： | 赵华;汤加勇;陈丹;贾刚;刘光芒;陈小玲 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12N9/20 | 分类号： | C12N9/20;C12R1/84 |
| 代理公司： | 成都中亚专利代理有限公司 51126 | 代理人： | 何渊 |
| 地址： | 625014 四川*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用毕赤酵母高效分泌表达重组猪胰腺脂肪酶PPL的方法，包括如下步骤：（1）提供密码子优化后猪胰腺脂肪酶rePPL基因序列；（2）构建酵母细胞中表达猪胰腺脂肪酶PPL的重组质粒pPICZαA-rePPL；（3）重组质粒pPICZαA-rePPL转化毕赤酵母X-33细胞；（4）筛选高表达转化菌，鉴定；（5）培养转化菌，获得猪胰腺脂肪酶PPL；（6）重组猪胰腺脂肪酶PPL的鉴定以及酶学活性分析。本发明方法对猪胰腺脂肪酶PPL的前534个碱基进行密码子优化后，使得其在毕赤酵母中得以高效表达且酶学活性与商品酶活性相当。同时本发明通过密码子优化，提高了酵母表达体系中重组猪胰腺脂肪酶的表达量，从而具有大规模发酵，商业化生产重组猪PPL的潜力和价值。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 酵母 高效 分泌 表达 重组 胰腺 脂肪酶 ppl 方法 | ||
【主权项】：
一种利用毕赤酵母分泌表达重组猪胰腺脂肪酶PPL的方法，包括以下步骤：（1）提供猪胰腺脂肪酶基因序列，以及密码子优化后的基因序列rePPL；（2）构建酵母细胞中表达rePPL的重组质粒pPICZαA‑rePPL；（3）重组质粒pPICZαA‑rePPL转化毕赤酵母X‑33细胞；（4）筛选高表达转化菌，鉴定；（5）培养转化菌，获得重组猪胰腺脂肪酶PPL；（6）重组猪胰腺脂肪酶PPL的鉴定以及酶学活性分析。
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