[发明专利]一种检测微小核糖核酸与胃癌组织的相关程度的检测方法

摘要

本发明公开了一种微小核糖核酸与胃癌组织的相关程度的检测方法。检测过程分为标本的准备，组织总RNA的提取，逆转录合成cDNA第一链，荧光定量聚合酶链反应（qPCR），用统计学方法进行数据分析等5个步骤，通过本方法能较为准确的测定所检测的微小核糖核酸与胃癌组织的相关程度。

主权项

一种检测微小核糖核酸与胃癌组织相关程度的检测方法，其特征在于，检测过程为：a、标本的准备：选取手术切除的胃癌标本80例，每例标本均留取肿瘤组织和距肿瘤边缘5cm以上的配对癌旁组织；手术标本离体后，于20‑35min内液氮速冻，保存于‑80℃冰箱备用；根据2010年国际抗癌联盟制定的TNM分期标准进行临床分期I，II，III和IV期各20例；所有病例均确诊为胃癌，临床资料完整，均未接受放化疗； b、组织总RNA的提取：采用Trizol裂解细胞，具体步骤参照说明书操作，分别提取胃癌组织及配对癌旁组织总RNA；分光光度计测定RNA浓度，琼脂糖凝胶电泳鉴定RNA的完整性；c、逆转录合成cDNA第一链：逆转录过程按照所购逆转录试剂盒的操作说明书进行；d、荧光定量聚合酶链反应（qPCR）：荧光定量聚合酶链反应（qPCR）体系使用了miR和内参U6引物以及PCR试剂盒；PCR程序为95℃10 min，95℃10s，60℃20s，72℃42s共40个循环，并进行溶解曲线检测；所有样品均做3个重复，阴性对照以水代替cDNA模板；e、用统计学方法进行数据分析：数据均以均数标准差（s）表示，应用SPSS18.0统计软件分析，计量资料采用独立样本t检验或配对设计t检验。