[发明专利]基于全血培养法处理鱼类染色体技术所用全血的方法在审
| 申请号： | 201410215094.4 | 申请日： | 2014-05-21 |
| 公开（公告）号： | CN103992984A | 公开（公告）日： | 2014-08-20 |
| 发明（设计）人： | 曹丽萍;丁炜东;殷国俊;杜金梁;贾睿;刘英娟;王家豪 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 李纪昌;曹翠珍 |
| 地址： | 214081 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种基于全血培养法处理鱼类染色体技术所用全血的方法，先将试验鱼麻醉，采血，将所得血液与ACD抗凝剂混合，得混合血液；再将所得混合血液与培养基混合，得混合液；将所得混合液叠加至Percoll分离液上，离心，去掉上层血浆，得到血浆层与分离液层交界处的淋巴细胞；然后将所得淋巴细胞加入培养基中，充分混匀，离心洗涤，得到细胞沉淀物；最后将所得细胞沉淀物转至培养基中，20～30℃培养72～96h。本发明提供的基于全血培养法制备鱼类染色体技术的全血的处理方法，能成功有效的分离出淋巴细胞，排除红细胞干扰，提高制备成功率，为保证试验结果奠定基础。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 培养 处理 鱼类 染色体 技术 所用 方法 | ||
【主权项】：
基于全血培养法处理鱼类染色体技术所用全血的方法，包括以下步骤：步骤1，将试验鱼麻醉，采血，将所得血液与ACD抗凝剂混合，得混合血液；步骤2，将步骤1所得混合血液与第一培养基混合，得混合液；第一培养基为0.1% FCS‑L‑15培养基；步骤3，将步骤2所得混合液加至体积百分数55～65的Percoll分离液上，离心，去掉上层血浆，得到血浆层与分离液层交界处的淋巴细胞；步骤4，将步骤3所得淋巴细胞加入第二培养基中，充分混匀，离心洗涤，得到细胞沉淀物；第二培养基为0.1% FCS‑L‑15培养基；步骤5，将步骤4所得细胞沉淀物转至第三培养基中，20～30℃培养72～96h；第三培养基为L‑15培养基。
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