[发明专利]一种多重微滴聚合酶链式反应的生物基因高通量定性检测方法

摘要

本发明公开了一种多重微滴聚合酶链式反应的生物基因高通量定性检测方法，建立了一种改进的微滴PCR高通量的扩增技术，对该技术在实验仪器、实验方法和试剂方面进行了改进，优化了实验步骤，减少了一些实验环节，对试验中需要的仪器进行了国产化，使该方法更容易进行，大大减少了人力、物力和财力的需求，使得微滴PCR技术可为一般实验技术人员掌握，可在国内大多数生物实验室开展。实验结果清晰可靠，本发明方法可实现对大量目标DNA分子同时进行高通量的扩增来达到高通量定性检测的目的。

主权项

一种多重微滴聚合酶链式反应的生物基因高通量定性检测方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步，针对待测生物样品分别设计PCR特异性引物对；第二步，使用上述特异性引物对在水油乳化剂中对相应的DNA模板进行微滴PCR扩增；所述水油乳化剂具体配制方法为：25℃下，取1体积份的微滴PCR水相，以6秒/滴的滴速，匀速滴入到2体积份的微滴PCR油相中，混合后形成均匀的水油乳化剂，其包含大小不等的微滴；所述水油乳化剂中微滴的直径为1～8μm，每微升的水油乳化剂包含3×10⁶到1×10⁷个微滴；第三步，PCR产物分离及纯化：收集微滴PCR扩增得到的PCR产物之后，经离心，取下层水相，清洁PCR产物或者直接进行相应的产物分析；第四步，对PCR产物进行检测，使用变性梯度凝胶电泳进行检测。