[发明专利]离体快繁中华蓑藓配子体的方法

摘要

本发明公开了一种离体快繁中华蓑藓配子体的方法，其包括以下顺序步骤：1)将生长于自然环境中的中华蓑藓成熟孢蒴表面消毒后，接种到无任何激素的改良Knop′s培养基上培养获得原丝体，再进行培养30天后获得配子体；2)将配子体单枝接种到用于配子体继代增殖的培养基上，培养获得新生配子体。本发明首次建立了离体快繁中华蓑藓配子体的方法，使用本发明的离体快繁方法，可以在短时间内实现人工大量扩繁中华蓑藓配子体。该项发明科研意义和实际利用价值明显，可以为利用苔藓植物指示和监测大气污染提供大量生长均一的理想试验材料。同时，也可以源源不断地为应用苔藓植物进行园林造景提供丰富的种苗，如建立苔藓园。

主权项

一种离体快繁中华蓑藓配子体的方法，其特征在于，所述方法包括以下顺序步骤：1)将中华蓑藓孢蒴表面灭菌后，接种到无任何激素的改良Knop′s培养基上，用无菌器械破碎孢蒴使孢子释放，培养10天后，孢子萌发产生原丝体，再培养30天后，经原丝体分化获得配子体，培养条件为：温度23±2℃，光照强度2000±250lx，光照时间14小时/天；所述无任何激素的改良Knop′s培养基配方为：改良Knop′s基本培养基+10g/L蔗糖+6g/L琼脂粉，其中改良Knop′s基本培养基配方为：KNO₃250mg/L、MgSO₄·7H₂O250mg/L、KH₂PO₄250mg/L、Ca(NO₃)₂·4H₂O1000mg/L、酒石酸氨0.115mg/L、NaFe‑EDTA36.7mg/L、MnSO₄·4H₂O11.15mg/L、H₃BO₃3.1mg/L、KI0.415mg/L、ZnSO₄·7H₂O4.3mg/L、CuSO₄·5H₂O0.0125mg/L、NaMoO₄·2H₂O0.125mg/L、CoCl₂·6H₂O0.0125mg/L；2)将步骤1)培养得到的配子体单株接种到配子体增殖扩繁的培养基上，进行培养30天，培养条件为：温度23±2℃，光照强度2000±250lx，光照时间14小时/天；所述配子体增殖扩繁的培养基配方为：1/3MS基本培养基+10g/L蔗糖+6g/L琼脂粉，其中MS基本培养基配方为：KNO₃1900mg/L、NH₄NO₃1650mg/L、MgSO₄·7H₂O370mg/L、KH₂PO₄170mg/L、CaCl₂·2H₂O440mg/L、MnSO₄·4H₂O22.3mg/L、ZnSO₄·7H₂O8.6mg/L、H₃BO₃6.2mg/L、KI0.83mg/L、NaMoO₄·2H₂O0.25mg/L、CuSO₄·5H₂O0.025mg/L、CoCl₂·6H₂O0.025mg/L、Na₂‑EDTA37.3mg/L、FeSO₄·7H₂O27.8mg/L、NaFe‑EDTA36.7mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素0.5mg/L、盐酸吡哆锌0.5mg/L、烟酸0.5mg/L；1/3MS基本培养基是指大量元素化合物的用量为配方规定用量的1/3，其中大量元素化合物为：KNO₃、NH₄NO₃、MgSO₄·7H₂O、KH₂PO₄、CaCl₂·2H₂O。