[发明专利]口服热淋清颗粒后肾脏组织两种化学成分的测定方法

摘要

本发明公开了一种口服热淋清颗粒后肾脏组织两种化学成分的确定及其含量测定方法，含量测定方法是采用高效液相色谱—质谱联用检测方法，在所建立的检测方法下对口服热淋清颗粒后肾脏组织中的化学成分没食子酸和原儿茶酸进行含量测定。本发明含量测定方法的精密度高，重现性好，稳定性好，测定结果准确，可有效评价口服热淋清颗粒后没食子酸和原儿茶酸在肾脏组织中的分布。

主权项

口服热淋清颗粒后肾脏组织两种化学成分的测定方法，其包括以下步骤：(1)测试样品的制备：(a)取热淋清颗粒0.5～4g，加5～10倍水溶解，通过灌胃给药方式给予大鼠(体重230‑270g)热淋清颗粒水溶液10ml/kg；(b)分别在30～360min，后对大鼠进行断头处死，解剖并分离肾脏组织，称重，取肾脏组织0.1～0.5g，加5～10生理盐水，粉碎，3000～6000r/min离心，取上层组织溶液转移至新空白EP管中；(c)加入内标岩白菜素母液10μl，然后按肾脏组织与沉淀试剂体积比为1：4～8沉淀蛋白，沉淀时间2～5min，涡旋混匀30～60s后，在0～10℃恒温条件下以10000～12000r/min离心5～15min(所述的沉淀试剂为乙腈‑甲醇‑乙醚(3:1:1)混合液并且添加1％～4％酸，所述酸选自甲酸、乙酸或其组合)(d)将上层液转移至新空白EP管中，于30～50℃氮气流吹干，残留物用100μl流动相溶解，涡旋混匀30～60s后，在0～10℃恒温条件下以10000～12000r/min离心5～15min，取上清液即为供试品溶液；(e)按步骤(b)至步骤(d)的方法对未服用药物的动物肾脏组织进行处理，得到空白溶液；(f)对照品溶液的制备：分别精密称取没食子酸对照品、原儿茶酸对照品、岩白菜素对照品0.01～1mg，各自加纯甲醇定容至10ml，即得三种母液，分别取三种母液适量至同一量瓶中，加甲醇稀释至所需浓度，即为对照品溶液；(2)LC‑MS/MS分析的色谱条件和检测条件：色谱柱为反相色谱柱，酸性乙腈或酸性甲醇：酸性水＝0～20:80～100(体积比)为流动相，流速为0.1～0.5mL/min，柱温为20～40℃，离子化方式为电喷雾条件，负模式监测，喷雾电压为2000～3000V，雾化温度为300～500℃，鞘气压力为30～50mTorr，辅助气压力为5～15mTorr，毛细管温度为200～400℃(所述的酸性乙腈或酸性甲醇或酸性水中，酸的浓度为0.05％～0.5％，所述酸选自甲酸、乙酸或其组合)；(3)测定法：分别精密吸取对照品溶液、空白溶液与供试品溶液5～20μL，注入高效液相色谱‑质谱联用仪，测定，即得。