[发明专利]一种基因突变和酶活性的检测方法

摘要

本发明提供一种基因突变的检测方法，步骤如下：（1）制备纳米金颗粒；（2）将得到的纳米金颗粒通过S-Au键自组装与巯基标记的DNA探针相连接，制得纳米金探针；之后将标记了纳米金颗粒的探针与靶DNA序列杂交，形成不对称dsDNA,在TaqDNA聚合酶作用下，使探针以靶序列为模板延伸为平末端双链DNA；（3）将FAM羧基荧光素标记的探针与相应的模板温育杂交形成FAM标记的双链DNA，将其与（2）中的平末端dsDNA用T4连接酶在室温下连接，冷冻离心，沉淀经洗涤、分离，检测并判断得到的FAM标记的连接产物。本发明的方法操作简便，能够快速、灵敏检测p53基因的点突变，此方法也可应用到酶活性的研究中。

主权项

一种基因突变的检测方法，其特征在于：步骤如下：（1）制备纳米金颗粒；（2）制备纳米金标记的双链DNA：将得到的纳米金颗粒通过S‑Au键自组装与巯基标记的DNA探针相连接，制得纳米金探针；之后将标记了纳米金颗粒的探针与靶DNA序列杂交，形成不对称dsDNA，在Taq DNA聚合酶作用下，使探针以靶序列为模板延伸为平末端双链DNA；（3）将FAM羧基荧光素标记的探针与相应的模板温育杂交形成FAM标记的双链DNA，将其与（2）中的平末端dsDNA用T4连接酶在室温下连接，冷冻离心，沉淀经洗涤、分离，检测并判断得到的FAM标记的连接产物：a、当步骤（2）所述的靶序列为与巯基探针互补的基因片段时，步骤（3）得到的沉淀中有可检测的荧光信号；b、当步骤（2）所述的靶序列为发生了单碱基突变的基因片段时，步骤（3）得到的沉淀中中无可检测的荧光信号；c、当步骤（2）所述的靶序列为任意序列时，步骤（3）得到的沉淀中无可检测的荧光信号。