[发明专利]一种用全局转录机制工程构建有机溶剂耐受型大肠杆菌的方法有效
| 申请号： | 201410247513.2 | 申请日： | 2014-06-06 |
| 公开（公告）号： | CN104004779A | 公开（公告）日： | 2014-08-27 |
| 发明（设计）人： | 倪晔;钱晓红;张法 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 无锡市大为专利商标事务所(普通合伙) 32104 | 代理人： | 时旭丹;刘品超 |
| 地址： | 214122 江苏省无锡市滨*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种用全局转录机制工程构建有机溶剂耐受型大肠杆菌的方法，属于生物工程技术领域。本发明包括：对全局转录因子σ70的编码基因rpoD进行随机突变构建突变文库，转化大肠杆菌进行高通量筛选，获得全局转录因子σ70的突变基因rpoDM1，携带该突变基因rpoDM1的大肠杆菌E.coliJM109/pHACMC9可耐受69%（v/v）的环己烷。本发明通过对全局转录因子σ70进行突变，显著提高了大肠杆菌对环己烷等有机溶剂的耐受性，为提高大肠杆菌等微生物菌株的有机溶剂耐受性提供了方法，为构建耐溶剂性全细胞生物催化剂提供理论依据。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 全局 转录 机制 工程 构建 有机溶剂 耐受 大肠杆菌 方法 | ||
【主权项】：
一种获得高有机溶剂耐受性菌株的定向改造方法，其特征在于步骤为：（1）以携带野生型rpoD基因的pHACM质粒为模板进行随机突变，获得rpoD突变基因；（2）以rpoD突变基因为引物，pHACM为模板，全质粒扩增构建σ70基因突变库；（3）转化大肠杆菌进行高通量筛选，以环己烷为有机溶剂压力，进行液体和琼脂平板交替筛选。
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