[发明专利]一种人免疫球蛋白的制备方法

摘要

本发明提供了一种高纯度的人免疫球蛋白的制备方法，采用低温乙醇提取法和层析法交叉应用，联合去除杂蛋白，提纯免疫球蛋白，可以很好地提高制品蛋白纯度，同时采用S/D灭活法加DV50纳米膜联合去除病毒，使制品更加安全有效。

主权项

一种人免疫球蛋白的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）血浆采集：收集具有高效价的原料血浆；（2）组分分离：将上述原料血浆用0.14mol/L氯化钠溶液稀释，并用醋酸缓冲液调pH为7.10±0.04，降温至0℃开始喷入冷乙醇，使最终乙醇浓度达到12%(v/v)，控制温度在‑2.5±0.5℃，用醋酸缓冲液调pH为7.10±0.04，搅拌2小时，加入硅藻土，压滤分离出上清液A；（3）沉淀压滤：向上述上清液A中继续喷入冷乙醇，使最终乙醇浓度达到20%(v/v)，控制温度在‑5.0±0.5℃，用醋酸缓冲液调pH为6.80±0.04，搅拌2小时，静置两小时，加入硅藻土，压滤分离，收集沉淀物B；（4）沉淀溶解：每Kg沉淀用9L 0.01mol/L氯化钠溶液将沉淀物B溶解后，加醋酸缓冲液调pH为5.00±0.04，喷入冷乙醇至最终乙醇浓度为17%，控制温度在‑4.5~‑5.5℃，搅拌2小时，静置6小时以上，对反应液进行压滤分离，收集压滤液C，冷却至‑3~‑5℃；（5）超滤浓缩：用0.5mol/L盐酸溶液调压滤液C pH为3.8~4.0，使用5倍体积的注射用水进行透析，透析至乙醇含量＜1%，浓缩至蛋白浓度＞3%，收集蛋白浓缩液D；（6）层析提纯：用醋酸缓冲液调蛋白浓缩液D pH为4.00~4.50，然后用磷酸‑NaOH缓冲液调节电导率为0.15~0.17s/m，然后将蛋白液上预先用磷酸‑NaOH缓冲液平衡好的Macrocap‑Q离子交换柱进行层析提纯，收集层析蛋白液E；（7）透析浓缩：向层析蛋白液E中边搅拌边缓慢加入0.5mol/L盐酸液，调节pH至3.80~4.00，用6倍体积的注射用水透析，透析至乙醇含量＜0.025%，将蛋白液浓缩至6%以上浓度，收集蛋白浓缩液F；（8）S/D灭活：将蛋白浓缩液F用1μm滤板于室温中进行过滤，之后加入磷酸三丁脂(TNBP)和吐温‑80，使得最终浓度为0.3%TNBP和1%吐温‑80，进行S/D灭活；（9）吸附纯化：收集灭活混合液G，上预先用平衡液平衡好的DEAE‑纤维素柱，进行洗涤液洗涤10次，洗脱液洗脱3次，用0.45~1.0um滤芯的澄清过滤器过滤蛋白洗脱液，收集过滤后的蛋白过滤液H；（10）超滤浓缩：将蛋白过滤液H用5倍体积的注射用水进行透析，将蛋白液浓缩至10%以上浓度，收集蛋白浓缩液I；（11）半成品配置；（12）DV50纳米膜除病毒；（13）分装：将上步收集的蛋白液用1M碳酸氢钠溶液调整pH至6.4~7.4分装。