[发明专利]可可茶子叶愈伤组织培养方法

摘要

可可茶的子叶诱导愈伤组织培养方法采用可可茶子叶为外植体，在SH、MS基本培养基中加入蔗糖、琼脂粉、2，4-二氯苯氧乙酸、苄基嘌呤、吲哚乙酸等的培养基中组织培养，得到可可茶愈伤组织。采用本发明组织培养方法以及使用的培养基可用于可可茶愈伤组织的培养。pH全部调为5.6，配制好的诱导愈伤组织培养基分装在培养瓶中，每瓶25ml，盖好瓶盖，在压力为0.1-0.15MPa下灭菌25分钟，将培养瓶置于22-26℃、光照强度为2000-30001x的温室中培养，每天光照12-14小时，培养98天后，转入2号培养基中继续培养诱导，培养7天后，转入3号培养基中继续培养诱导，培养35天后，长出胚状芽，继续培养至长出叶片、成苗。

主权项

可可茶子叶愈伤组织培养方法，其特征在于包括如下步骤： (1)外植体制备 材料消毒：将剥去种皮的种子置于50％漂白粉溶液中浸泡10min，用灭菌的ddH2O冲洗3‑5次，每次5分钟，在超净工作台上用灭菌的吸水纸吸干种子表面的水液，把胚挑出，将每一个子叶切成50mm²小块； (2)愈伤组织诱导 将(1)处理好的可可茶子叶小块接入诱导愈伤组织1号培养基中诱导愈伤组织，该诱导愈伤组织培养基为在1升SH基本培养基中加入下述的原料及其配比制成： 蔗糖               20‑40g 琼脂粉             5.5‑7.2g 2，4‑二氯苯氧乙酸  1.0‑3.0mg pH为5.6，配制好的诱导愈伤组织培养基分装在培养瓶中，每瓶25ml，盖好瓶盖，在压力为0.1‑0.15MPa下灭菌25分钟，将培养瓶置于22‑26℃、光照强度为2000‑3000lx的温室中培养，每天光照12‑14小时，培养98天后，转入2号培养基中继续培养诱导，该诱导愈伤组织培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成： pH为5.6，配制好的诱导愈伤组织培养基分装在培养瓶中，每瓶25ml，盖好瓶盖，在压力为0.1‑0.15MPa下灭菌25分钟，将培养瓶置于22‑26℃、光照 强度为2000‑3000lx的温室中培养，每天光照12‑14小时，培养7天后，转入3号培养基中继续培养诱导，该诱导愈伤组织培养基为在1升SH基本培养基中加入下述的原料及其配比制成： pH为5.6，配制好的诱导愈伤组织培养基分装在培养瓶中，每瓶25ml，盖好瓶盖，在压力为0.1‑0.15MPa下灭菌25分钟，将培养瓶置于22‑26℃、光照强度为2000‑3000lx的温室中培养，每天光照12‑14小时，培养35天后，长出胚状芽，继续培养至叶片长出、成苗及愈伤组织褐化。