[发明专利]一种水凝胶固定化漆酶‑介体酶促反应器

摘要

本发明公开了一种水凝胶固定化漆酶‑介体酶促反应器，其是由以下方法获得（1）将β‑双酮溶于漆酶溶液A中，得到溶液C；（b）向三口烧瓶中加入烯类共聚单体、交联剂和溶液C；（c）向三口烧瓶中通入惰性气体反应10‑20min，后置于15℃~65℃恒温水浴30‑90min，获得水凝胶；（d）将水凝胶水洗4‑8遍，置于‑50℃~‑80℃冷冻干燥至恒重，即获得水凝胶固化漆酶‑介体酶促反应器；本发明获得的水凝胶固化漆酶‑介体酶促反应器，具有吸附与降解功能，可促进水体中的污染物与酶促反应体系的接触，提高降解效率，且避免了因漆酶被动适应载体所导致的酶构型变化甚至活性的降低，漆酶固载率高于90%，酶活回收率达11.2%。

主权项

一种水凝胶固化漆酶‑ 介体酶促反应器，其特征在于，所述水凝胶固化漆酶‑ 介体酶促反应器是通过以下步骤获得的：a）将β‑ 双酮溶于漆酶溶液A 中，得到溶液C，溶液C 中漆酶酶活为3~10 U/ml，β‑ 双酮浓度为50~500 mM ；所述漆酶溶液A 是将漆酶溶于醋酸‑ 醋酸钠缓冲溶液、醋酸溶液、磷酸氢二钠‑ 磷酸二氢钠缓冲溶液、磷酸氢二钠‑ 柠檬酸缓冲溶液或纯水中的一种获得的；所述β‑ 双酮为乙酰丙酮；b）向三口烧瓶中加入烯类共聚单体、交联剂和溶液B，形成水凝胶前驱体溶液；所述溶液B是指将壳聚糖溶于乙酸溶液而获得壳聚糖浓度为5‑25 g/L 的溶液；其中，水凝胶前驱体溶液中烯类共聚单体与壳聚糖的质量比为30:1 ~ 3:1 ，交联剂的质量为烯类共聚单体和壳聚糖质量总和的3.0%‑20.0%；所述烯类共聚单体为丙烯酰胺，交联剂为N,N’‑ 亚甲基双丙烯酰胺；c）将步骤a）获得的溶液C加入到步骤b）获得的水凝胶前驱体溶液中，混合后使得漆酶总酶活不低于20U，然后向三口烧瓶中通入惰性气体反应10‑20min，后将三口烧瓶置于15℃ ~65℃恒温水浴30‑90min，获得水凝胶；d）将步骤c 获得的水凝胶水洗4‑8 遍，置于‑50℃ ~ ‑80℃冷冻干燥至恒重，即获得水凝胶固化漆酶‑ 介体酶促反应器。