[发明专利]一种高灵敏度的多菌灵完全抗原的合成方法

摘要

一种高灵敏度的多菌灵完全抗原的合成方法，属于生物化工技术领域。本发明中合成了由多菌灵的类似物2-氯苯并咪唑和6-氨基己酸反应得到的具有羧基的半抗原H1，与载体蛋白偶联制备免疫原；基于异源包被可以进一步提高抗体的灵敏度，所以在ELISA操作中，用多菌灵的类似物氨基氯苯并咪唑和6-氨基己酸反应得到半抗原H2与OVA偶联得到偶联物作为包被原。本发明制备的完全抗原呈现出特异性的多菌灵抗原决定簇，使得筛选出高特异性的多菌灵单克隆抗体成为可能。产生的抗体特异性高、灵敏度高，可用于建立酶联免疫吸附分析方法和胶体金试纸快速检测法，从而用于快速检测食品中的多菌灵残留。

主权项

一种多菌灵完全抗原的合成方法，其特征在于步骤如下：（1）前体261的合成：将氨基己酸甲酯盐酸盐与等摩尔量的2‑氯苯并咪唑混合，于二异丙基乙基胺中微波150℃过夜反应13h，得到产物，经纯化，即得到前体261，产率为10%；（2）多菌灵半抗原H1的合成：将步骤（1）制备的前体261溶于四氢呋喃中，室温搅拌反应过夜，60℃旋蒸除去四氢呋喃，以1mol/L的HCl溶液调节pH 至6~7，制备色谱纯化得多菌灵半抗原H1；（3）多菌灵完全抗原的制备：将多菌灵半抗原H1与载体蛋白上的氨基进行偶联，即得到多菌灵完全抗原。