[发明专利]从天花粉中综合提取多种生物活性成分的方法

摘要

本发明公开了一种天花粉中综合提取多种生物活性成分的方法。首先天花粉中加入乙醇超声波震荡，加热提取，提取液抽滤，滤液浓缩、干燥，得到醇溶物；所剩滤渣提取，提取液离心，上清液处理后进行蒸发浓缩、干燥，得到水溶性粗多糖；所剩沉淀物加入氢氧化钠溶液进行加热提取，提取液离心，得到上清液处理后得到沉淀碱溶性多糖，洗涤干燥后得到碱溶性粗多糖；所剩沉淀物接着提取天花粉蛋白，提取后所剩沉淀物进一步提取天花粉凝集素；最后所剩的沉淀物洗涤、烘干，得到天花粉淀粉。利用本发明可以从天花粉中综合提取醇溶物、水溶性多糖、碱溶性多糖、蛋白、凝集素和淀粉多种有效生物活性成分，更大程度地利用了天花粉资源，符合目前经济可持续发展。

主权项

一种从天花粉中综合提取多种生物活性成分的方法，其特征在于，所述提取方法包括以下步骤：a、醇溶物的提取：首先在天花粉中加入5～10倍天花粉重量的乙醇，然后在20～25℃条件下超声波震荡5～10分钟，超声波处理后加热至80～90℃回流提取2～4小时，移出提取液；将移出的提取液进行抽滤，所得滤渣按照上面同样方法再提取一次，提取后移出提取液，提取液移出后再次进行抽滤，所得滤渣用于步骤b进一步提取；合并两次抽滤所得的滤液，将所得滤液进行减压浓缩，回收乙醇；当滤液浓缩至膏状后再次进行真空干燥，干燥至粉末状，得到粉状醇溶物；b、天花粉水溶性多糖的提取：将步骤a所得滤渣中加入滤渣质量3～6倍的蒸馏水，加热至50～70℃条件下搅拌提取2～3小时，移出提取液进行离心，离心后移出上清液；在移出上清液后所剩的沉淀物中加入沉淀物质量3～6倍的蒸馏水，加热至50～70℃条件下搅拌再次提取2～3小时，移出提取液，进行离心，离心后移出上清液；合并两次离心后得到的上清液，两次提取后所剩沉淀物用于步骤c进一步提取；将合并后上清液中加入无水乙醇至体积百分浓度为40～60%，静置收集沉淀物用于步骤c进一步提取，所得上清液进行旋转蒸发，浓缩至原上清液体积的1/6～1/8，所得浓缩液中加入质量百分浓度为20%的三氯乙酸，当三氯乙酸终浓度为8%时停止加入，然后搅拌30～60分钟，搅拌后在4℃条件下静置10～16小时，静置后离心，离心后所得沉淀物用于步骤c进一步提取，所得上清液中加入无水乙醇至体积百分浓度为70～80%，静置沉淀出的多糖用体积百分浓度为95%的乙醇进行洗涤，洗涤后进行真空干燥，干燥至粉末状，得到粉状天花粉水溶性粗多糖；c、天花粉碱溶性多糖的提取：收集步骤b得到的沉淀物，在收集的沉淀物中加入质量浓度为4%的氢氧化钠水溶液，所述沉淀物与氢氧化钠溶液二者之间的质量比为1：3～7，加热至55～65℃条件下提取30～50分钟，提取后移出提取液，进行离心，离心后移出上清液；移出上清液后的沉淀物按照同样的方法进行第二次提取，提取后移出提取液、离心分离，移出第二次上清液，同时得到所剩的沉淀物，该沉淀物用于步骤d进一步提取；合并两次所得上清液，在上清液中加入浓度为12mol/L浓盐酸中和至pH 值为7.0，接着进行离心，移出上清液，得到沉淀碱溶性多糖，用水洗涤所得碱溶性多糖3～5次，洗涤后进行真空干燥，干燥至粉末状，得到粉状碱溶性粗多糖；d、天花粉蛋白的提取：在步骤c所剩沉淀物中加入pH值为10的氢氧化钠水溶液，所述沉淀物与氢氧化钠水溶液二者之间的比例为1g：5～10mL，在4～20℃条件下搅拌提取30～50分钟，提取后移出提取液进行离心分离，离心分离后移出上清液，得到的沉淀物用于步骤e进一步提取；所得上清液减压浓缩至原体积的1/5～1/6，所得浓缩液中加入5倍体积的无水乙醇，所述无水乙醇预先冷却至4～10℃，无水乙醇边加入边搅拌，充分搅拌后于4℃条件下静置18～22h；静置后离心，离心后得到沉淀的蛋白；所得蛋白用体积百分浓度为95%乙醇洗涤2～3次，洗涤后真空干燥至粉末状，得天花粉蛋白；e、天花粉凝集素的提取：在步骤d得到的沉淀物中加入pH值5.5的盐酸水溶液，所述沉淀物与盐酸水溶液二则之间加入量的比例为1g：5～10mL，然后在4～20℃下搅拌提取12～24小时，提取后移出提取液，移出提取液后所剩的沉淀物用于步骤f进一步提取；所得提取液中加入饱和硫酸铵溶液，所述提取液与饱和硫酸铵溶液之间的体积比1：0.1～2，静置收集所得沉淀、透析过夜后真空干燥至粉末状，干燥后得到天花粉凝集素；f、天花粉淀粉的提取：步骤e中所剩的沉淀物首先用蒸馏水洗涤3～5次，以除去沉淀物中残留的盐酸，然后在100～110℃烘干4～6小时，烘干后得到天花粉淀粉。