[发明专利]一种酒精长期保存后河蟹基因组DNA的高效提取方法

摘要

本发明公开了一种提取酒精长期保存后河蟹基因组DNA的方法，其步骤包括：（1）组织采取：剪取酒精保存的中华绒螯蟹第二步足肌肉少许，烘干酒精。（2）基因组DNA提取：配制裂解缓冲液后，水浴消化，离心，加饱和NaCl溶液和氯仿，离心，再加氯仿，离心，加异丙醇，离心沉淀DNA，洗涤，离心后烘干，加去离子水或TE溶液保存。本发明解决了酒精长期保存后的中华绒螯蟹DNA提取难题，本发明方法简便、有效的提取河蟹DNA，提取的DNA数量足、质量高，几乎不受蛋白质的污染，可用于后续多种分子生物学分析，从而为河蟹的遗传多样性研究、种质保护和资源利用提供一项技术手段，具重要科学意义和实用价值。

主权项

一种提取酒精长期保存后河蟹基因组的DNA方法，其特征在于包括如下步骤：（1）剪取肌肉组织；（2）提取基因组DNA，步骤如下；将第（1）步剪取的河蟹肌肉置烘箱烘干酒精；将肌肉组织剪碎，再加裂解缓冲液和蛋白酶K进行消化，其中裂解缓冲液和蛋白酶K的成分和浓度为：含10mmol/L EDTA，0.1mol/LNaCl，0.01M Tris‑Cl的STE缓冲液，10% SDS，20mg/mL的蛋白酶K；河蟹肌肉用量与加裂解缓冲液和蛋白酶K的量之间的关系是：河蟹肌肉10‑30mg，加300‑500μL STE，50‑150μL SDS和10‑30μL蛋白酶K，于50‑60℃的水浴锅中消化，直至组织消化完全溶液变得清亮透明为止；将步骤a得到的消化液离心，取上清液加饱和NaCl溶液轻混匀；再加氯仿颠倒轻混匀；离心，取上清液再次加入氯仿；离心，取上清液加入异丙醇；离心沉淀DNA；洗涤DNA，轻摇混匀；离心，将沉淀DNA烘干；在烘干后的DNA加去离子水或TE溶液，并加入RNA酶去除DNA中的RNA，保存备用。