[发明专利]一种铁线莲栽培品种维奥利特·伊利莎白的组织培养方法

摘要

本发明公开了一种铁线莲栽培品种维奥利特·伊利莎白的组织培养方法，包括以下步骤：（1）外植体表面灭菌前处理；（2）外植体表面灭菌与初代培养；（3）继代增殖培养；（4）壮苗培养；（5）生根培养；（6）苗的驯化和移栽。本发明所述的方法能够有效克服铁线莲维奥利特·伊利莎白现有繁殖技术存在的缺陷，加快了繁殖速度，增加了繁殖系数，实现了铁线莲的快速繁殖，对于其在园林上的广泛应用和推广具有较强的价值。

主权项

一种铁线莲栽培品种维奥利特·伊利莎白的组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）外植体表面灭菌前处理：取当年生、无病虫害铁线莲栽培品种维奥利特·伊利莎白的健壮枝条，剪成1cm带芽茎段作为外植体，首先将外植体用洗衣粉溶液浸泡30min，然后用流水冲洗1h；（2）外植体表面灭菌与初代培养：在无菌瓶中放20‑30个带芽茎段外植体，首先加入75%的酒精浸泡20s，然后用无菌水冲洗2次，再用0.1%的升汞灭菌，灭菌3‑8min，在灭菌过程中轻轻晃动三角瓶，使升汞与外植体充分接触，灭菌完成后用无菌水冲洗4‑5次，冲洗完成后切除外植体两端与升汞接触的部分，接种于无菌的初代培养基上，每个处理接种30个外植体，在培养温度为25±2℃，空气相对湿度50‑60%，光照时间12h/d，光照强度为2000lx的条件下，进行进行14‑20d的初代培养，茎段腋芽开始萌动，茎尖明显伸长，30‑40d后芽点长成带有3‑5节的新梢，形成无菌试管苗；（3）继代增殖培养：逐节切下步骤（2）所述的无菌试管苗转移到增殖培养基上进行继代增殖培养30d，每个处理接种30株小苗，培养条件为培养温度为25±2℃，空气相对湿度50‑60%，光照时间12h/d，光照强度为2000lx；（4）壮苗培养：将步骤（3）增殖后的苗接种在壮苗培养基上进行壮苗培养30d，培养条件为：温度为25±2℃，空气相对湿度50‑60%，光照时间12h/d，光照强度为2000lx；（5）生根培养：将经过步骤（4）壮苗培养后的苗高大于3cm的苗作为生根苗，接入生根培养基中，每个处理接种30瓶，培养40d，培养条件为：温度为25±1℃，空气相对湿度50‑60%，光照时间12h/d，光照强度为2000lx；（6）苗的驯化和移栽：当步骤（5）所述的经过生根培养后的不定根长至1cm时，首先将生根苗在自然光照条件下炼苗2‑3d，然后，敞开瓶盖再炼苗3‑4d,进行生根苗的移栽，移栽前将生根苗取出，清水中轻轻漂洗生根苗粘附的培养基，洗净幼苗根系，然后移栽到基质中，移栽后浇一次透水，此时温度为25±1℃，空气相对湿度50‑60%，光照时间12h/d，光照强度为2000lx，7d以后，可逐步施加水肥并常规管理。