[发明专利]一种H9N2亚型禽流感病毒的转瓶培养方法无效
| 申请号： | 201410306875.4 | 申请日： | 2014-06-30 |
| 公开（公告）号： | CN104073470A | 公开（公告）日： | 2014-10-01 |
| 发明（设计）人： | 李泽君;滕巧泱 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院上海兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00;C12R1/93 |
| 代理公司： | 上海世贸专利代理有限责任公司 31128 | 代理人： | 严新德 |
| 地址： | 200241 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明一种H9N2亚型禽流感病毒的转瓶培养方法，包括一个培养MDCK-HA细胞的步骤，将MDCK-HA细胞放置于转瓶中培养；一个在MDCK-HA细胞中接种H9N2亚型禽流感病毒的步骤，待转瓶中的细胞长成单层细胞达90%以上时，接种H9N2亚型禽流感病毒，在细胞培养箱中孵育1～2小时，孵育结束后加入2%NCS DMEM维持液培养，加入的所述的2%NCS DMEM维持液的体积为50ml，置于细胞培养箱中培养，收取细胞上清。本发明采用了MDCK-HA细胞系，而且优化了转瓶培养的条件，可以使得H9N2亚型禽流感病毒快速增殖，从而达到较高的病毒滴度，并获得较好的免疫效果。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 h9n2 禽流感 病毒 培养 方法 | ||
【主权项】：
一种H9N2亚型禽流感病毒的转瓶培养方法，其特征在于包括以下步骤：1）一个培养MDCK‑HA细胞的步骤，将MDCK‑HA细胞放置于转瓶中，加培养液，将转瓶放置于细胞培养箱中培养18～22h；2）一个在MDCK‑HA细胞中接种H9N2亚型禽流感病毒的步骤，待转瓶中的细胞长成单层细胞达90%以上时，弃去培养液，采用PBS溶液洗1～5次，并弃去PBS溶液，接种H9N2亚型禽流感病毒，接种的剂量为8×104TCID50，在细胞培养箱中孵育1～2小时，每隔10～20分钟摇动转瓶一次，孵育结束后，弃去病毒液，采用PBS洗1～5次，再弃去PBS；3）然后加入2%NCS DMEM维持液培养，所述DMEM维持液的体积为50ml，置于细胞培养箱中培养，培养48小时，收取细胞上清。
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