[发明专利]一株以葡萄糖为底物合成粘康酸的大肠杆菌工程菌

摘要

本发明公开了一株以葡萄糖为底物合成粘康酸的大肠杆菌工程菌，属于生物技术领域。本发明向大肠杆菌中引入了2，3‑二羟基苯甲酸(2，3‑DHB)至粘康酸(MA)的代谢途径，并强化了大肠杆菌自身从葡萄糖到2，3‑DHB的代谢途径。本发明提供的新途径所需要的外源基因少，减少了宿主菌表达外源基因的负担和外源基因的不兼容问题。此外，宿主菌不是营养缺陷型，无需外源添加昂贵莽草酸或其他芳香族氨基酸，摇瓶发酵粘康酸产量为1.15g/L。

主权项

1.一株以葡萄糖为底物合成粘康酸的大肠杆菌工程菌，其特征在于，引入了2，3‑二羟基苯甲酸至粘康酸的代谢途径，并强化了大肠杆菌自身从葡萄糖到2，3‑DHB的代谢途径；所述2，3‑DHB至MA的代谢途径通过表达异源2，3‑二羟基苯甲酸脱羧酶和邻苯二酚1，2‑双加氧酶来实现；所述强化大肠杆菌自身从葡萄糖到2，3‑DHB的代谢途径，通过表达分支酸异构酶、异分支酸裂解酶、2,3‑二氢‑2,3‑二羟基苯甲酸脱氢酶实现，还表达了DAHP合酶基因aroGfbr与莽草酸激酶基因，以解除苯丙氨酸对同工酶AroG的反馈抑制，并强化莽草酸途径；编码所述2，3‑二羟基苯甲酸脱羧酶的基因entX的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；编码所述邻苯二酚1，2‑双加氧酶的基因catA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；编码所述分支酸异构酶的基因entC的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；编码所述异分支酸裂解酶的基因entB的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；编码所述2,3‑二氢‑2,3‑二羟基苯甲酸脱氢酶的基因entA的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述DAHP合酶基因aroGfbr的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；编码所述莽草酸激酶的基因aroL的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；所述entX和catA以pACYCDuet‑1或pETDuet‑1为载体进行共表达；所述aroGfbr和aroL以pCDFDuet‑1为载体进行共表达，所述entC、entB、entA以质粒pRSFDuet‑1进行共表达。