[发明专利]一种快速提取纯化检测毛样蛋白方法

摘要

本发明公开了一种快速提取纯化检测毛样蛋白方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品分类，分别剪成小段；(2)0.15％壬基酚聚氧乙烯(9)醚60℃清洗20min，吸干；(3)dd水60℃清洗5min，吸干；(4)二氯甲烷和乙醇洗常温清洗20min，吸干；(5)dd水60℃清洗5min，吸干；(6)0.1M甲醇碱KOH，室温30min，吸干；(7)dd水60℃清洗5min，吸干；(8)磨碎：用水浸湿，液氮研磨；(9)提取：200μL of7M尿素，2M硫脲，50mM Tris，and50mM TCEP，pH4，室温，过夜消化；.(10)纯化步骤。

主权项

一种快速提取纯化检测毛样蛋白方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品分类，分别剪成小段；(2)0.15％壬基酚聚氧乙烯(9)醚60℃清洗20min，吸干；(3)超纯水60℃清洗5min，吸干；(4)二氯甲烷和乙醇洗常温清洗20min，吸干；(5)超纯水60℃清洗5min，吸干；(6)0.1M甲醇碱KOH，室温30min，吸干；(7)超纯水60℃清洗5min，吸干；(8)磨碎：用水浸湿，液氮研磨；(9)提取：200μL of7M尿素，2M硫脲，50mM Tris，and50mM TCEP，pH4，室温，过夜消化；.(10)纯化步骤1).向0.1ml蛋白溶液中加入0.4ml甲醇，涡旋，瞬时离心，10s；2).再加入0.2ml氯仿，涡旋，瞬时离心，10s；3)再加入0.3ml ddH2O，剧烈震荡，瞬时离心，1min；4).小心弃掉上清，用枪吸；5).加入0.3ml甲醇，涡旋，瞬时离心，2min，沉淀；6).弃掉上清，倒置室温干燥，干燥完成后保存备用；7).50‑100微升5％SDS溶解蛋白，不容物可用蛋白上样buffer溶解，备用，跑SDS‑PAGE。