[发明专利]稳定表达人MATE1转运体的细胞模型的构建及应用无效
| 申请号： | 201410325014.0 | 申请日： | 2014-07-09 |
| 公开（公告）号： | CN104212834A | 公开（公告）日： | 2014-12-17 |
| 发明（设计）人： | 雷红梅;孙思源;李丽萍;涂美娟;王凯;白梦如;周慧;曾苏;蒋惠娣 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/66;C12N5/10;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 张法高;赵杭丽 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明提供构建pcDNA3.1（+）-hMATE1重组质粒的方法，获得的pcDNA3.1(+)-hMATE1重组质粒用于构建MDCK-hMATE1、MDCK-hOCT1/hMATE1和MDCK-hOCT2/hMATE1三种细胞模型。建立的MDCK-hMATE1细胞模型在MDCK细胞上稳定高表达hMATE1，可作为快速、高通量筛选hMATE1的底物和抑制剂的研究模型；可预测由hMATE1介导的药物-药物相互作用；可运用本发明建立的MDCK-hOCT1/hMATE1和MDCK-hOCT2/hMATE1双转染细胞模型研究细胞对hOCT1/hOCT2和MATE1共同底物药物的转运研究。 | ||
| 搜索关键词： | 稳定 表达 mate1 转运 细胞 模型 构建 应用 | ||
【主权项】：
一种构建pcDNA3.1（+）‑hMATE1重组质粒的方法，其特征在于，通过以下步骤实现：先从冰冻人肾脏组织中提取总RNA，经逆转录PCR获得cDNA文库，通过设计含有Hind Ⅲ和KpnⅠ两个酶切位点的特异性引物，其核苷酸序列如SEQ ID No：1和SEQ ID No：2所示，以该cDNA为模板特异性扩增获得人SLC47A1基因的编码区域片段，得到的目的基因片段通过Hind Ⅲ和KpnⅠ两个酶切位点连接到表达载体质粒pcDNA3.1(+)‑Hygro上，构建pcDNA3.1(+)‑hMATE1重组质粒。
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