[发明专利]一种糖基化肽段固相富集并质谱分析的方法

摘要

本发明属蛋白质分析领域，涉及一种利用氨氧基修饰的磁性纳米材料富集糖基化肽的新方法，其包括：首先对糖肽上的羟基进行高碘酸纳NaIO₄氧化使得羟基变为醛基，再将氨氧基修饰的磁性纳米材料Fe₃O₄@ONH₂置于氧化后的糖肽溶液中，通过氨氧基基团和糖肽中糖链氧化后得到的醛基之间反应，将糖肽固定在磁性纳米材料上，随后将未和纳米材料反应的非糖肽清洗除去,最后再利用去糖链酶将捕获的糖肽从材料上解离下来，送入质谱分析糖基化肽。本发明方法步骤简单、操作方便、快速高效，可以实现糖基化肽的高灵敏、高选择性质谱分析。

主权项

1.一种糖基化肽段固相富集并质谱分析的方法，其特征在于，采用氨氧基修饰的磁性纳米材料Fe3O4@ONH2为吸附剂，实现糖基化肽的选择性富集；其包括步骤：(1)对多肽样品进行高碘酸钠氧化，使糖肽上糖链中的羟基氧化成为醛基；多肽样品溶于10mM乙酸铵CH3COONH4缓冲液中；多肽样品被10mM的高碘酸钠NaIO4避光氧化1小时，然后加入终浓度为20mM的亚硫酸钠Na2SO3混合10分钟以终止氧化反应；(2)加入Fe3O4@ONH2材料与多肽溶液充分混合；所述的Fe3O4@ONH2材料表面被氨氧基修饰；(3)外加磁场，使得磁性材料和溶液分离，收集下层固体相；(4)用合适的缓冲液清洗材料，每次清洗后外加磁场将材料和溶液分开，收集材料；(5)用碳酸氢铵缓冲液重新混匀材料，并在其中加入去糖链酶PNGase F充分混合；(6)外加磁场再次将材料从溶液中分离后，取上清液与有机基质混合，进行基质辅助激光解吸离子化质谱分析。