[发明专利]一种茄子抗褐纹病的室内鉴定方法有效
申请号: | 201410333673.9 | 申请日: | 2014-07-15 |
公开(公告)号: | CN104164472A | 公开(公告)日: | 2014-11-26 |
发明(设计)人: | 吴仁锋;杨绍丽 | 申请(专利权)人: | 武汉市蔬菜科学研究所 |
主分类号: | C12Q1/18 | 分类号: | C12Q1/18;C12N1/14;C12R1/645 |
代理公司: | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人: | 张红兵 |
地址: | 430345 湖北省*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | 本发明属于园艺作物抗病性鉴定技术领域,具体涉及一种茄子抗褐纹病的室内鉴定方法。本发明包括茄子的育苗与定植、茄褐纹病菌孢子悬浮液制备、病原菌侵染处理、发病调查等步骤。本发明在室内选用茄子商品果作为鉴定材料,先用自制的十字形刀具在茄果上制造“十”字伤口,再用含茄褐纹病菌孢子悬浮液的滤纸片进行侵染处理,最后进行发病调查,明确了适宜的茄褐纹病菌孢子悬浮液浓度、“十”字伤口的长度和深度。与大田接种相比,避免了气候条件的不适宜、环境中其它病虫害影响等因素,在室内进行抗病性筛选条件容易控制、标准一致、发病迅速、操作简便、结果可靠,可节省大量人力物力,尤其适合大批量的茄子育种材料的褐纹病抗性的鉴定。 | ||
搜索关键词: | 一种 茄子 抗褐纹病 室内 鉴定 方法 | ||
【主权项】:
一种茄子抗褐纹病的室内鉴定方法,其特征在于:包括以下步骤:1)茄子育苗与定植将供试的茄子种子播种在装有灭菌基质的穴盘中,种子萌发出苗后分穴到一穴一株,当茄苗长至3‑4片真叶时,移植田间定植,每个品种栽种40株,定植后按常规施肥和灌水,期间不使用任何药剂,待茄子结果后田间采收商品茄果到室内进行离体人工接种;2)茄褐纹病菌孢子悬浮液制备将保藏号为CCTCC NO:M2014313的茄褐纹病菌(Phomopsis vexans)HZ‑4菌株接种至PDA平板上,将该PDA平板置于25℃黑暗培养9‑11d至产生黑色分生孢子器,用消过毒的镊子取分生孢子器并用消过毒的玻片碾压使之散出分生孢子,用无菌水冲洗,经充分震荡使孢子释放出来,静置片刻,取上清,用显微镜观察分生孢子量,在目镜10×,物镜10×条件下每个视野观察18‑22个孢子,将剪好的5mm×5mm的滤纸片放入茄褐纹病菌孢子悬浮液中,充分浸湿备用,得到含茄褐纹病菌孢子悬浮液的滤纸片;3)病原菌侵染处理取大小一致的成熟茄果,用消过毒的十字形刀具在健康无病的茄果上划5mm长2mm深的“十”字伤口,然后取步骤2)的含茄褐纹病菌HZ‑4菌株孢子悬浮液的滤纸片贴在茄果“十”字伤口处作病原菌侵染处理,将侵染后的茄果统一平放在塑料盒内,用喷壶喷水至未见明显水滴下流,用保鲜膜覆盖,在25‑28℃条件下保湿培养,5d后开始调查,同时将对照的茄果划“十”字伤口后只接种无菌水;各品种接种7‑8个茄果,在每个果实的果肩至果脐部随机划“十”字伤口10个以上,相邻两个伤口之间留足足够的发病空间;4)发病调查接种后第5d开始调查,记录各处理的发病情况;待各处理的病情基本稳定、无新病斑出现时,停止调查,统计其病果率及发病点数,评价各品种对褐纹病的抗性水平;其中步骤1)中基质配方为:草炭土、蛭石和田园土按体积比1:1:1混合,用福尔马林溶液消毒。茄子对褐纹病的抗性标准:免疫(IM):发病率为0,高抗(HR):0<发病率≤20%,抗病(R):20%<发病率≤40%,耐病(MR):40%<发病率≤60%,感病(S):60%<发病率≤100%。
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