[发明专利]一种E2F3基因沉默对前列腺癌动物模型中全血E2F3影响的方法

摘要

本发明公开了一种E2F3基因沉默对前列腺癌动物模型中全血E2F3影响的方法，通过免疫组化研究不同前列腺癌组织中E2F3的表达情况，明确E2F3与前列腺癌分级、分期及预后的关系；通过构建针对E2F3的AAV病毒载体，沉默E2F3基因并进行相关的外功能实验；通过建立裸鼠前列腺癌模型，成功应用AAV病毒载体进行体内实验并明确E2F3基因沉默前后裸鼠全血中E2F3mRNA表达情况。本发明的E2F3基因作为前列腺癌基因治疗的高效靶点，为后续的以E2F3为靶点的前列腺癌基因治疗体内实验奠定基础；针对E2F3的重组RNA干扰AAV病毒能够抑制肿瘤细胞的增殖并能够促进细胞的凋亡，并有效抑制动物模型肿瘤的生长并降低了外周血标本内E2F3的表达，为以E2F3为靶点的肿瘤基因沉默疗法提供了可靠的理论和实验基础。

主权项

一种E2F3基因沉默对前列腺癌动物模型中全血E2F3影响的方法，其特征在于，该E2F3基因沉默对前列腺癌动物模型中全血E2F3影响的方法包括：步骤一，通过收集不同前列腺癌石蜡标本，采用real‑timePCR、WESTERN、免疫组化，分析E2F3及其所调基因在前列腺癌中的表达情况；步骤二，建立以AVV为载体的RNAi平台，并分析干扰序列对前列腺癌LNCaP细胞中E2F3基因沉默的影响；步骤三，并经体外实验证实E2F3基因沉默对LNCaP细胞中E2F3及相关调控基因的影响及对细胞增殖及凋亡的影响；应用裸鼠进行原位前列腺癌动物模型的构建；步骤四，应用AAV干扰载体进行肿瘤的局部注射后明确肿瘤组织中E2F3在mRNA及蛋白质水平的表达情况及对肿瘤生长抑制情况，最后应用实时定量PCR进行全血E2F3mRNA的检测，明确作为前列腺癌肿瘤标记物的可能性。