[发明专利]高产N-乙酰氨基葡萄糖代谢工程菌及其构建方法和应用

摘要

本发明公开了一种高产N‑乙酰氨基葡萄糖工程菌及其构建方法和应用，该工程菌是通过将编码UDP‑N‑乙酰氨基葡萄糖差向异构酶基因和编码6‑磷酸氨基葡萄糖合成酶基因导入大肠杆菌表达，并敲除大肠杆菌中的N‑乙酰氨基葡萄糖分解利用代谢途径酶的基因构建而成的重组大肠杆菌；构建的工程菌株利用葡萄糖为底物进行发酵培养合成N‑乙酰氨基葡萄糖。本发明的工程菌利用葡萄糖合成N‑乙酰氨基葡萄糖发酵水平高，同时副产物的积累较少，具有工业化生产的潜力。

主权项

一种产N‑乙酰氨基葡萄糖代谢工程菌，其特征在于：所述的工程菌是通过以下方法构建得到的：A、敲除大肠杆菌中的基因簇nagDCABE，获得基因簇nagDCABE失活的菌株；B、全基因合成编码UDP‑N‑乙酰氨基葡萄糖差向异构酶的neuC1基因如SEQ IDNO.5所示，并克隆表达载体；C、以大肠杆菌基因组为模板，PCR扩增获得编码6‑磷酸氨基葡萄糖合成酶的glmS基因如SEQ ID NO.8所示，克隆至步骤B获得的表达载体上，获得双基因表达载体；D、将步骤C获得的双基因表达载体转化入步骤A所得的菌株中，获得第一种产N‑乙酰氨基葡萄糖代谢工程菌；或将步骤C获得的双基因表达载体整合至步骤A所得菌株的染色体上，获得第二种产N‑乙酰氨基葡萄糖代谢工程菌。