[发明专利]一种环境雌激素无标记免疫传感器的制备方法及应用

摘要

本发明公开了一种环境雌激素无标记免疫传感器的制备方法及在环境雌激素的检测中的应用，属于新型纳米功能材料和环境检测技术领域。本发明利用两种新型纳米功能材料修饰工作电极，利用二者的协同催化作用以及对抗体的吸附作用，从而制备了一种灵敏度高、特异性好、检测快速、制备简单的检测环境雌激素的无标记电化学免疫传感器。

主权项

一种环境雌激素无标记免疫传感器的制备方法，所述环境雌激素无标记免疫传感器包括：工作电极、参比电极和对电极，所述工作电极的基底电极为玻碳电极，其表面依次修饰CoFe2O4/rGo、戊二醛、Au@PdNRs‑Ab、牛血清蛋白（BSA），所述参比电极为饱和甘汞电极，所述对电极为铂丝电极，所述CoFe2O4/rGo为铁酸钴/还原石墨烯复合材料，所述Au@PtNRs‑Ab为金@钯核壳纳米棒复合材料孵化的环境雌激素抗体；其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：a、制备CoFe2O4/rGo；b、制备Au@PdNRs‑Ab；c、制备环境雌激素无标记免疫传感器工作电极；其中，步骤a制备CoFe2O4/rGo的具体步骤如下：将8~12 mg氧化石墨烯超声分散到25~35 ml无水乙醇中，依次加入0.5~1.5 ml 0.2 mol/mL的 Fe(NO3)3水溶液、0.25~0.75 ml of 0.2 mol/L Co(NO3)2水溶液和2.0~3.0 ml氨水，80℃下搅拌10~14h，然后转移至高压反应釜中，180℃下反应4~6h；冷却至室温后，离心分离，于50℃真空干燥箱中烘干，即得CoFe2O4/rGo；步骤b制备Au@PdNRs‑Ab的具体步骤如下：将20mL金纳米棒溶液和20mL 0.05~0.2 mol/L的十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）溶液混合，在30~45℃下搅拌，并顺序加入3~6 mL 0.1 mol/L的 L‑抗坏血酸（AA）溶液、0.5~1 mL 0.03 mol/L的氯化钯（PdCl2）溶液和 3~6 mL 0.1 mol/L的氢氧化钠（NaOH）溶液，停止搅拌，静置1~3h，离心分离，加入20mL pH7.4的PBS缓冲溶液，然后再加入环境雌激素抗体（Ab），在4℃下震荡24h，得到Au@PdNRs‑Ab；步骤c制备环境雌激素无标记免疫传感器工作电极的具体步骤如下：① 对工作电极进行预处理，使其表面光洁；② 在①中得到的电极表面滴加5~10 µL 1~5 mg/mL的CoFe2O4/rGo水溶液，室温下自然晾干；③ 在②中得到的电极表面滴加5~10 µL的戊二醛，室温下自然晾干；④ 在③中得到的电极表面滴加5~8 µL 10 µg/mL的Au@PdNRs‑Ab溶液，4 ℃ 冰箱中保存晾干，超纯水清洗，晾干成膜，4 ℃保存；⑤ 在④中得到的电极表面滴加4~6 µL 100 µg/mL的BSA溶液，用以封闭电极上的非特异性活性位点，4 ℃ 冰箱中保存晾干，超纯水清洗，晾干成膜，即得到环境雌激素无标记免疫传感器的工作电极。