[发明专利]甲醛交联/染色质免疫沉淀与分子克隆相结合筛选HSF靶DNA的方法在审

专利信息
申请号: 201410339027.3 申请日: 2014-07-16
公开(公告)号: CN104293909A 公开(公告)日: 2015-01-21
发明(设计)人: 郭丽红;刘艳芳;苏源;杨晓虹;陈子牛 申请(专利权)人: 昆明学院
主分类号: C12Q1/68 分类号: C12Q1/68
代理公司: 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 代理人: 汤东凤
地址: 650214 云南*** 国省代码: 云南;53
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摘要: 发明公开了一种甲醛交联/染色质免疫沉淀与分子克隆相结合筛选HSF靶DNA的方法,本发明的方法采用染色质免疫沉淀(ChIP)与分子克隆技术相结合的方法在体内分离和鉴定了拟南芥热激转录因子HSF结合的靶DNA。首先热激诱导拟南芥叶片的HSF与靶DNA结合,接着甲醛处理使HSF与靶DNA共价交联,然后用HSF抗体进行染色质免疫沉淀,染色质免疫沉淀DNA经过衔接头介导的PCR扩增并进行分子克隆,最后进行测序,并将测序结果在基因组数据库中分析、鉴定靶DNA片段在基因组上的位置及对应的HSF靶基因。甲醛交联/染色质免疫沉淀技术与分子克隆相结合是筛选热激转录因子(HSF)的靶DNA的理想方法。
搜索关键词: 甲醛 交联 染色质 免疫 沉淀 分子 克隆 相结合 筛选 hsf dna 方法
【主权项】:
一种甲醛交联/染色质免疫沉淀与分子克隆相结合筛选HSF靶DNA的方法,其特征在于包括如下步骤: 步骤一、热激处理拟南芥幼苗; 步骤二、甲醛处理使HSF与靶DNA共价交联; 步骤三、染色质免疫沉淀获得HSF的靶DNA; 步骤四、染色质免疫沉淀DNA经过衔接头介导的PCR扩增后进行分子克隆及测序; 步骤五、将测序结果在基因组数据库中分析、鉴定靶DNA片段在基因组上的位置。 
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