[发明专利]用于用动物细胞大量生产源自外源基因的蛋白质的表达载体及其应用

摘要

本发明人进行了专门的研究并成功地构建了能够在哺乳动物宿主细胞内高水平生产源自外源基因的蛋白质的表达载体，其包含：通过改变密码子为哺乳动物中最不常用的密码子而弱化了表达的翻译弱化的二氢叶酸还原酶基因顺反子；和具有将外源基因整合进高转录活性启动子和高稳定性聚腺苷化信号之间的克隆位点的基因盒。

主权项

一种能够在哺乳动物宿主细胞内高水平生产源自外源基因的蛋白质的表达载体，包含：(a)翻译弱化的二氢叶酸还原酶基因盒(翻译弱化的DHFR基因盒)，其表达通过改变密码子为哺乳动物中最不常用的密码子而被弱化，其中所述翻译弱化的DHFR基因盒的密码子被改变为：丙氨酸为GCA，精氨酸为CGA，天冬酰胺为AAU，天冬氨酸为GAU，半胱氨酸为UGU，谷氨酰胺为CAA，谷氨酸为GAA，甘氨酸为GGU，组氨酸为CAU，亮氨酸为UUA，赖氨酸为AAA，脯氨酸为CCA，苯丙氨酸为UUU，丝氨酸为UCA，苏氨酸为ACU，酪氨酸为UAU，和/或缬氨酸为GUA，其中所述翻译弱化的DHFR基因盒的密码子改变区域是所述基因盒的全长的30％或更多；和(b)基因盒，包含用于将外源基因整合进高转录活性启动子和高稳定性聚腺苷化信号之间的克隆位点。