[发明专利]蝴蝶兰无菌花梗再生扩繁的方法

摘要

本发明为一种蝴蝶兰无菌花梗再生扩繁的方法，涉及种苗培养技术领域，主要涉蝴蝶兰植株快速繁殖技术，具体涉及一种蝴蝶兰品种的植株再生方法。本发明是从健壮的蝴蝶兰母株上切取一定长度的花梗腋芽茎段为外植体材料，无菌花梗经过初代培养，腋芽张开且叶片翠绿有光泽，切下腋芽后对花梗在继代培养基上培养，之后从花梗腋芽切口处不断长出芽点逐渐形成腋芽，待腋芽张开继续切下，再次将花梗接种在继代培养基上培养，这样培养可以在一株花梗上获得大量的丛生芽，得到的丛生芽可以一部分以芽繁芽的方法继续继代培养。本发明的优点是后代可保持母系稳定的遗传性状，便于花期控制和产业化统一管理，成活率可达90%。

主权项

一种蝴蝶兰无菌花梗再生扩繁的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将带有侧芽的无病虫害的蝴蝶兰花梗剪成2～3cm的节段，将芽点外层的苞叶用镊子等工具剔除，加入4～6ml吐温20充分搅拌后在自来水下冲洗30min以上，转移至超净工作台内用70%～75%的酒精消毒30s左右，再用无菌水处理2～3次，加入2%NaClO溶液处理5～6min后用无菌水冲洗4～5次，用消毒滤纸吸干表面水分，切去花梗上下两端与消毒液接触的表面，接种至初代培养基中培养，继代培养基为: 1/2MS或/和MS +2.0～5.5mg/L6‑BA+0.2～0.5mg/LNAA+25～30g/L蔗糖+5～6.5g/L琼脂+350～450mg/L柠檬酸或/和维生素C或/和pvp或/和活性炭+30～40g/L香蕉泥或/和马铃薯汁或/和椰子汁，pH值为5.4～5.9，培养条件为：温度25±2℃，培养初期的7～10d进行暗培养，以后光照时间为11～13h/d,光照强度2000～3000lux；  （2）将被切腋芽花梗以初代培养基作为继代培养基继代培养，继代培养基为: 1/2MS或/和MS +2.0～5.5mg/L6‑BA+0.2～0.5mg/LNAA+25～30g/L蔗糖+5～6.5g/L琼脂+350～450mg/L柠檬酸+30～40g/L香蕉泥，pH值为5.4～5.9；培养条件为：温度25±2℃，光照时间11～13h/d,光照强度2000～3000lux；  （3）当丛生芽被诱导长至2cm左右高时，将芽切割分开成单枝，转移到生根培养基中培养，生根培养基为：1/2MS或/和MS+0.5～1.5mg/L NAA +25～30g/L 蔗糖 +6 g/L琼脂 +1～3g/L 活性炭或/和柠檬酸或/和维生素C或/和pvp +40g/L香蕉泥或/和马铃薯汁或/和椰子汁；培养条件为：温度25±2℃，光照时间11～13h/d，光照强度2000～3000lux； （4）试管苗炼苗及移栽：当诱导出根系的培养苗长至3～4cm高，有2～3条根，3～4片叶片，叶长度2～3cm时，就可进行炼苗，将培育苗取出培养箱，带瓶培养苗在苗木培养室自然光下初炼苗放置4～6d，后在培养室自然光下打开培养瓶盖炼苗2～4d，期间用喷壶喷洒蒸馏水至叶片，保证叶片不失水以增强试管苗对室外环境的适应能力；然后从培养瓶中取出小苗，洗净根部培养基，对根用0.1%高锰酸钾浸泡3～5min后取出用滤纸吸干或自然干燥，用灭菌的水苔包裹根部种植于穴盘中，保持空气湿度在80%以上。