[发明专利]基于DNA条形码的鉴别乌梢蛇的引物及PCR-RFLP方法和试剂盒无效
| 申请号： | 201410348910.9 | 申请日： | 2014-07-21 |
| 公开（公告）号： | CN104164494A | 公开（公告）日： | 2014-11-26 |
| 发明（设计）人： | 晁志 | 申请（专利权）人： | 晁志 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海麦其知识产权代理事务所(普通合伙) 31257 | 代理人： | 董红曼 |
| 地址： | 510515 广东省广州市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明属于中药品种鉴定技术领域，提出一种鉴别乌梢蛇及其伪品的聚合酶链反应-限制性酶切图谱分子鉴定方法(PCR-RFLP)。本发明提出的PCR扩增所用引物序列为：DK1-CO1：5’-CAA CTA ACC ACA AAG ACA TCG G-3’，DK1-CO2：5’-CTT CTG GGT GGC CGA AAAATC A-3’；乌梢蛇的特征DNA碱基序列为：5’-ACTAGT-3’(位于COI序列第121位至126位)及5’-GGAAACC-3’(位于COI序列第353位至359位)；限制性内切酶Spe I可识别并切割特征序列5’-ACTAGT-3’，而限制性内切酶BstE II不能识别特征序列5’-GGAAACC-3’，两种限制性内切酶仅将乌梢蛇双酶切成两条片段。本发明鉴定过程为：提取样本DNA；用引物DK1-CO1、DK1-CO2进行PCR扩增；纯化PCR产物；用限制性内切酶Spe I和BstE II消化PCR产物；琼脂糖凝胶电泳分析结果；通过与乌梢蛇的PCR-RFLP特征结果相比较，即可判断供试品是否为乌梢蛇。本发明还提供用于鉴别方法的试剂盒。本发明方法准确、快速、可靠，可广泛用于中药材鉴定。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 dna 条形码 鉴别 乌梢蛇 引物 pcr rflp 方法 试剂盒 | ||
【主权项】：
用于鉴别乌梢蛇PCR‑RFLP方法的PCR扩增引物，其特征在于，所述引物序列为：DK1‑CO1：5’‑CAACTAACCACAAAGACATCGG‑3’；DK1‑CO2：5’‑CTTCTGGGTGGCCGAAAAATCA‑3’。
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