[发明专利]一种栝楼抗肿瘤活性蛋白及其制备方法和应用

摘要

本发明提供了一种栝楼抗肿瘤活性蛋白及其制备方法，以及该蛋白在制备抗肿瘤药物中的应用。其制备方法是将全栝楼粉碎，加入蛋白提取液4℃搅拌过夜，随后加入预冷的丙酮低温沉淀蛋白，离心后用蛋白提取液溶解得到栝楼粗蛋白；采用硫酸铵分级沉淀、阴离子交换色谱和凝胶过滤色谱对栝楼粗蛋白中抗肿瘤活性组分进行筛选、分离及纯化，得到栝楼抗肿瘤活性蛋白。该蛋白可明显抑制大肠癌DLD1细胞、乳腺癌MCF-7细胞、膀胱癌T24细胞和宫颈癌HeLa细胞的存活，可以在制备抗肿瘤药物中应用。

主权项

一种栝楼抗肿瘤活性蛋白，其特征在于，通过包括如下步骤的方法制得：第一步：取全栝楼，研磨粉碎后，加入蛋白提取液，4℃下浸泡并搅拌过夜，离心后取上清液，即为栝楼蛋白粗提液；所述的蛋白提取液为磷酸缓冲液；所述的全栝楼和蛋白提取液的质量比为1:4‑7；第二步：在栝楼蛋白粗提取液中加入1.5‑2倍体积的‑20℃预冷的丙酮，沉淀蛋白0.5‑1小时，4℃离心，收集沉淀，在‑20℃下放置，使丙酮完全挥发，冷冻干燥，得到栝楼粗蛋白；第三步：将栝楼粗蛋白用磷酸缓冲液冰上溶解，离心后取上清液，上清液中加入固体硫酸铵，至饱和度为30％，再搅拌20分钟，然后离心20分钟，弃去上清液收集沉淀，沉淀加少量磷酸缓冲液溶解，然后将其装入透析袋中，置于4℃去离子水中透析48小时，浓缩后冷冻干燥即得到抗肿瘤粗蛋白；第四步：将上述抗肿瘤粗蛋白溶解于磷酸盐缓冲液中，离心后取上清液，加入到Q阴离子交换层析柱，收集穿透峰；第五步：将上述穿透液浓缩加入到Sephacryl S‑100凝胶过滤柱中，然后用磷酸缓冲液进行洗脱，收集洗脱峰，冷冻干燥，纯化得到抗肿瘤活性蛋白。