[发明专利]一种检测脂肪酶酶活的荧光分析法

摘要

本发明公开了一种在水溶液中快速、方便地检测脂肪酶酶活的荧光分析法。本发明利用了硫化镉量子点优异的光学性质，将量子点作为信号元件，同时巯基乙酸甲酯作为脂肪酶的底物，其水解产物巯基乙酸可以作为硫化镉量子点的稳定剂。发展出一种具有成本低、操作简单、方便快捷等特点的荧光酶活检测分析法。

主权项

一种检测脂肪酶酶活的荧光分析法，其特征在于，具体包括如下步骤：(1)采用巯基乙酸甲酯作为脂肪酶的底物，Tris‑HCl缓冲溶液调节底物溶液的pH值；(2)得到脂肪酶酶活的动力学曲线：向步骤(1)中调节好pH的反应液中加入不同浓度的脂肪酶溶液，混匀，调节反应温度，反应一段时间后，用移液枪移取适当体积的脂肪酶水解液，向其中依次加入硫化钠和氯化镉溶液，混匀后在激发波长为350nm，发射波长范围为400‑620nm，最大发射波长为470nm处直接测定其荧光强度；根据水解时间的不同，以荧光强度的大小为纵坐标，反应时间为横坐标，绘制脂肪酶酶活的动力学曲线；(3)得到脂肪酶酶活检测标准曲线：将巯基乙酸甲酯溶液分别加入到不同浓度脂肪酶溶液中，在适宜的温度和pH条件下分别反应相同的时间后，用移液枪取出一定体积的反应液，向其中依次加入硫化钠和氯化镉溶液，混匀、测定其荧光强度；以荧光强度的大小作为纵坐标，脂肪酶的浓度作为横坐标，绘制标准曲线。