[发明专利]一种含自体基质细胞的生物美容制剂

摘要

本发明提供了一种含自体基质细胞的生物美容制剂的制备方法，其中，所述方法包括通过从自体外周血中获取自体血浆和培养获得自体基质细胞，将自体基质细胞加入到自体血浆中制备成生物美容制剂，同时提供了由自体基质细胞和自体血浆制备成生物美容制剂，并添加生长因子和抗氧化因子，可用于皮肤除皱，粉刺瘢痕修复，烧伤、外伤和挛缩疤痕以及抗衰老等修复改善。

主权项

1.一种含自体基质细胞的生物美容制剂的制备方法，其中，所述方法为通过从自体外周血中获取自体血浆和自体基质细胞，将自体基质细胞加入到自体血浆中制备成生物美容制剂，并添加了生长因子和抗氧化因子；所述自体基质细胞由离心获取自体血浆后的30‑35ml血细胞，经淋巴分离液密度梯度离心获得单个核细胞，用基质细胞无血清完全培养基重悬，按1‑3×106细胞/ml加入到75cm2培养瓶中15ml，于37℃，5％CO2培养箱中生长48小时；其中，所述基质细胞无血清完全培养基含10％无血清营养添加物和10‑20ng/ml重组人碱性成纤维细胞生长因子；48小时后对培养基质细胞换液，用10ml移液管吸弃培养液，加入10ml新鲜的基质细胞无血清完全培养基，75cm2培养瓶继续放置37℃，5％CO2培养箱中生长72小时；72小时后基质细胞在75cm2培养瓶中生长融合达到80％以上，用10ml移液管吸弃培养液，取5ml 1×PBS洗涤1次培养瓶底，加入2ml质量体积比为0.25％的胰酶到培养瓶中，放置37℃，5％CO2培养箱中消化2‑3分钟；消化后加入200微升胎牛血清终止消化，再加入5ml生理盐水，用10ml移液管吹打，吸至50ml离心管中，用5ml的生理盐水洗涤一次，同样加入到50ml离心管中，1200转每分钟离心5分钟收集基质细胞；离心后用1ml基质细胞无血清完全培养基重悬，进行细胞传代培养，即1瓶75cm2培养瓶的细胞扩至2瓶75cm2培养瓶中进行培养，每瓶加入15ml基质细胞无血清完全培养基，于37℃，5％CO2培养箱中生长48小时后换液，继续培养72小时后基质细胞生长融合达到80％以上，继续传代培养3代；传代培养3代后用胰酶进行消化并用生理盐水洗涤2次，计数后即获得基质细胞，放置冰箱4℃存放备用；另外部分基质细胞将加入冻存液，将1ml 6×106细胞/ml基质细胞放入冻存管中冻存；所述自体基质细胞加入鼠抗人SDF1单克隆抗体和兔抗鼠IgG1‑PE，染色后经流式细胞仪检测基质细胞高表达，SDF1阳性率大于80％以上；所述制备方法中添加的生长因子仅为表皮生长因子、碱性成纤维生长因子和角蛋白18中的一种以上；所述制备方法中添加的抗氧化分子仅为超氧化歧化酶、胎盘提取精华素和银杏叶提取液中的一种以上。