[发明专利]一种柴胡药材的检测方法

摘要

本发明属于中药材质量检测领域，具体涉及一种柴胡药材的质量检测方法。该方法包括对柴胡所含的柴胡皂苷a、d的测定以及对柴胡药材农药残留量的测定。本发明解决了传统理化特性的鉴别方法的操作复杂和局限性以及质量难以调控的技术问题，以提供了一种准确度高，操作简便快速，成本低廉的检测方法，具有良好的应用前景和经济效益。

主权项

一种柴胡药材的检测方法，其特征在于，该方法包括如下柴胡皂苷a、d总量的测定步骤以及农药残留量的测定步骤，其中，A：所述柴胡皂苷a、d总量的测定包括如下步骤：(1)精密称取胡皂苷a、胡皂苷d对照品，加甲醇制成每1mL含胡皂苷a0.4mg、胡皂苷d0.5mg的溶液，即为对照品溶液；(2)精密称取待测柴胡药材粉末0.5g，加入含5％浓氨试剂的甲醇溶液25mL，30℃水温超声处理，滤过后用20mL甲醇分2次洗涤容器及药渣，合并洗液和滤液并回收溶剂至干；残渣加甲醇溶解并定容至5mL，滤过后取续滤液，即为供试品溶液；(3)按照高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A、以水为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：从0‑50min，流动相A：流动相B的体积比由25％：75％→90％：10％；从50‑55min，流动相A：流动相B的体积比为90％：10％；检测波长为210nm；理论塔板数按柴胡皂苷a峰计算不低于10000；分别精密称取对照品溶液20μl和供试品溶液10‑20μl，注入液相色谱仪，测定；B：所述农药残留量的测定包括如下步骤：(1)精密称取三苯基磷酸酯适量，加丙酮制成每1ml含100μg三苯基磷酸酯的溶液，作为内标贮备液；分别精密量取各农药对照品贮备溶液1ml及所述内标贮备液1ml，加丙酮定容至100ml，作为混合对照品贮备溶液；分别精密量取适量，加乙腈定容制成20‑1000ng/ml的不同浓度的溶液，作为混合对照品溶液；另取核糖酸内酯适量，加乙腈溶解制成每1ml含20mg核糖酸内酯的溶液，另取山梨醇适量，加水溶解制成每1ml含山梨醇10mg的溶液；分别精密量取上述核糖酸内酯、山梨醇溶液各1ml混匀，加乙腈定容至10ml，作为分析保护剂；(2)精密称取待测药材细粉10g，并加入氯化钠1g混匀，精密加入丙酮100ml，冰浴超声处理30分钟，离心，将上清液迅速移入装有1g无水硫酸钠的具塞锥形瓶中，放置30分钟；随后精密量取上述溶液60ml减压浓缩至近干，并加入体积比为1：1的环已烷‑乙酸乙酯溶液溶解样品并定容至10ml，过滤后取滤液经GPC凝胶渗透色谱净化，以体积比为1：1的环已烷‑乙酸乙酯溶液为流动相洗脱，收集洗脱液，移入KD瓶中，减压浓缩至近干；向上述样品中加入体积比为1：1的乙酸乙酯‑丙酮混合溶液5ml溶解，并转移至石墨碳‑氨基混合固相萃取小柱上，以体积比为1：1的乙酸乙酯‑丙酮混合溶液15ml洗脱，收集洗脱液，氮吹至近干，随后加入所述内标贮备液5μl，加乙腈定容至1ml，作为供试品溶液；(3)精密量取上述各浓度混合对照品溶液及供试品溶液各400μL，并分别加入所述分析保护剂100μL混匀，随后分别精密吸取1μL，进行气相色谱‑质谱联用仪测定；其中，所述气相色谱分析条件为：取规格为30m×0.25mm×0.25um的弹性石英毛细管柱DB17ms，以高纯氦气为载气，柱流速1.3ml/分钟，进样量1μl，采用高压不分流进样，设置进样口温度为230℃，升温程序具体为：初始温度60℃，以30℃/分钟升至120℃、以10℃/分钟升至200℃、以2℃/分钟升至230℃、以30℃/分钟升至300℃，并保持7分钟；所述EI源质谱测定的条件为：设置电子能量70eV，离子源温度230℃，接口温度250℃。