[发明专利]一种分析动物性食品中四类29种限用兽药残留的UPLC-MS/MS方法

摘要

一种分析动物性食品中四类29种限用兽药残留的UPLC‑MS/MS方法，其特征在于：采用改进的QuEChERS方法进行样品前处理，样品经McIlvaine缓冲液‑乙腈提取，提取液酸化、盐析，取少量乙腈相，用C18和NH2吸附剂分散固相萃取净化，净化液浓缩、定容后，采用超高效液相色谱‑串联质谱仪(UPLC‑MS/MS)检测。本发明方法解决了四环素类兽药难与其他多类兽药同时提取、净化的难题，同时简化了样品处理步骤，具有高效、快速、成本低、操作简便等优势，净化效果好，灵敏度高，准确度和精密度均符合多残留分析方法的要求。

主权项

1.一种分析动物性食品中四类29种限用兽药残留的UPLC‑MS/MS方法，其特征在于：是采用改进的QuEChERS方法进行样品前处理，样品经McIlvaine缓冲液‑乙腈提取，提取液酸化、盐析，取少量乙腈相，用C18和NH2吸附剂分散固相萃取净化，净化液浓缩、定容，采用超高效液相色谱‑串联质谱法即UPLC‑MS/MS进行测定的方法；具体步骤如下：a、准确称取匀浆好的样品2.00g，精确至0.01g，于50mL聚丙烯塑料离心管中，加入2mL0.1mol/LNa2EDTA‑McIlvaine缓冲液，3mL乙腈，于旋涡混合器上涡旋2min，4000转/min，离心5min，收集提取液于另一50mL离心管中；b、残渣加入5mL乙腈，于旋涡混合器上涡旋2min，4000转/min，离心5min，合并提取液；c、于提取液中依次加入200μL冰乙酸，1.0g氯化钠，于旋涡混合器上涡旋1min，4000转/min，离心5min，取2mL上层乙腈相于10mL聚丙烯塑料离心管中；d、分别加入100mgC18和100mgNH2吸附剂，涡旋1min，4000转/min，离心5min，上清液于40℃条件下氮气吹干，残渣加1mL甲醇‑0.1％甲酸水定容，过0.22μm有机滤膜，待测；所述甲醇与0.1％甲酸水的体积比为10:90；e、准备标准工作溶液：分别称取各标准品适量，磺胺类兽药用乙腈溶解并定容，金刚烷胺用1％甲酸乙腈溶解并定容，喹诺酮类兽药用0.03mol/L氢氧化钠溶液溶解，甲醇定容，配制成浓度均为100μg/mL的标准储备液，于4℃条件下保存，分别吸取29种兽药标准储备液0.25mL于25mL容量瓶，用甲醇稀释并定容，配制成浓度为1.0μg/mL的混合标准工作液，于4℃条件下保存，可使用一个月；f、准备基质匹配标准溶液：对空白鸡肉样品按相同前处理方式处理，定容得到空白样品基质溶液；分别取适量混合标准工作溶液，氮气吹干，用空白样品基质溶液溶解，配制浓度为2.5ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL的系列基质匹配标准溶液；g、采用UPLC‑MS/MS法对基质匹配标准溶液和供试样品进行测定，以浓度为横坐标，定量离子的峰面积为纵坐标绘制标准曲线，以此标准曲线来计算供试样品中目标兽药的残留量；采用的色谱条件为：C18反相色谱柱，流动相由有机相和水相组成，有机相是甲醇、乙腈，水相是水、甲酸水，采用梯度洗脱，流速0.2mL/min，柱温30‑40℃，进样体积5‑10μL；采用的质谱条件为：电喷雾正离子电离ESI+，多反应监测扫描，毛细管电压：3.0Kv；离子源温度：110℃；脱溶剂气温度：350‑400℃；锥孔电压10‑90V，碰撞能量10‑90V。