[发明专利]含MyoDI基因启动子片段的重组质粒的构建方法在审
| 申请号： | 201410383229.8 | 申请日： | 2014-08-06 |
| 公开（公告）号： | CN104131019A | 公开（公告）日： | 2014-11-05 |
| 发明（设计）人： | 许厚强;桓聪聪;陈伟;赵佳福;张雯;周迪 | 申请（专利权）人： | 贵州大学 |
| 主分类号： | C12N15/64 | 分类号： | C12N15/64 |
| 代理公司： | 贵阳中新专利商标事务所 52100 | 代理人： | 李亮;程新敏 |
| 地址： | 550025 贵州省贵*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种含MyoDI基因启动子片段的重组质粒的构建方法，本发明采用4对5'端加磷的引物扩增不同长度的MyoDI基因启动子片段，与用高保真DNA聚合酶扩增出的不含启动子区的pEGFP-N3载体片段进行平末端连接，构建重组质粒。这种方法简便精确获得重组载体，与双酶切的方法比较具有不受酶切位点限制的优势，同时也不引入新的酶切位点，使实验结果更加符合单一变量的要求，实验结果更加可信。 | ||
| 搜索关键词： | myodi 基因 启动子 片段 重组 质粒 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种含MyoDI基因启动子片段的重组质粒的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：1）从牛的血液中提取总DNA，经过PCR扩增得到的不同长度的MyoDI基因启动子片段；2）将质粒pEGFP‑N3经过PCR扩增后，获得不含启动子区的pEGFP‑N3载体片段；3）将不含启动子区的pEGFP‑N3载体片段与不同长度的MyoDI基因启动子片段进行平末端连接；4）将连接产物转化到E.coli DH5α细胞，筛选出阳性克隆子，经测序验证获得重组载体。
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