[发明专利]一种利用原核表达系统制备神经生长抑制因子重组蛋白的方法在审
| 申请号： | 201410387169.7 | 申请日： | 2014-08-08 |
| 公开（公告）号： | CN104177487A | 公开（公告）日： | 2014-12-03 |
| 发明（设计）人： | 张文宇;魏鹏;白羊;黄奋飞;陈胜亮;阮卡;陈星;章永垒 | 申请（专利权）人： | 厦门北大之路生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/475 | 分类号： | C07K14/475;C12N15/70 |
| 代理公司： | 厦门市精诚新创知识产权代理有限公司 35218 | 代理人： | 李振瑞 |
| 地址： | 361000 福建省厦*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用原核表达系统制备神经生长抑制因子重组蛋白的方法。步骤为：将hGIF基因克隆入pGEX-4t-1得到pGEX-4t-GIF重组载体；将Rab3A基因克隆入pMAL-c2x得到pMAL-c2x-Rab3A重组载体；所述hGIF基因序列见SEQIDNO:5；所述Rab3A基因序列见SEQIDNO:6；将所得重组载体导入大肠杆菌表达菌株Rosseta（DE3）中，构建含有重组表达载体的pGEX-4t-GIF基因工程菌和pMAL-c2x-Rab3A基因工程菌；诱导表达；收集菌体；纯化；利用凝血酶和FactorXa分别酶切，得到重组的hGIF蛋白和重组Rab3A蛋白。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利用 表达 系统 制备 神经 生长 抑制 因子 重组 蛋白 方法 | ||
【主权项】：
一种利用原核表达系统制备神经生长抑制因子重组蛋白的方法，其特征在于，步骤如下,pGEX‑4t‑GIF重组载体和pMAL‑c2x‑ Rab3A重组载体构建：将人神经生长抑制因子hGIF基因克隆入pGEX‑4t‑1载体中得到pGEX‑4t‑GIF重组载体；将Rab3A基因克隆入pMAL‑c2x载体中，得到pMAL‑c2x‑ Rab3A重组载体；所述hGIF基因序列见SEQ ID NO:5；所述Rab3A基因序列见SEQ ID NO:6；将所得重组载体导入大肠杆菌表达菌株Rosseta（DE3）中，构建含有重组表达载体的pGEX‑4t‑GIF基因工程菌和pMAL‑c2x‑ Rab3A基因工程菌；诱导表达：将所得pGEX‑4t‑GIF基因工程菌和pMAL‑c2x‑ Rab3A基因工程菌分别培养至OD600=0.5时，加入诱导剂IPTG进行诱导培养；收集菌体：离心收集诱导表达的菌体，重悬菌体，破碎菌体，离心收集上清；纯化：纯化所收集的菌体中表达的重组蛋白；酶切得到重组蛋白：利用凝血酶和Factor Xa分别酶切上述纯化的蛋白，得到重组的hGIF蛋白和重组的Rab3A蛋白。
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