[发明专利]磁珠法提取细菌基因组DNA的试剂盒及其提取方法

摘要

本发明公开一种磁珠法提取细菌基因组DNA的试剂盒及其提取方法，该试剂盒包括以下七种组分缓冲液A、缓冲液B、缓冲液C、磁珠悬浮液D、缓冲液E、缓冲液F、缓冲液G，其中磁珠悬浮液D的组成为每200mmol/L氯化钠水溶液中含有50mg单分散Fe3O4@SiO2‑AEAPS纳米磁珠；该试剂盒提取方法包括以下六个步骤菌体重悬、裂解、沉淀核酸、磁珠吸附、洗涤、洗脱。本发明试剂盒采用高效的单分散纳米磁珠并配合独特的缓冲液系统，使得提取出来的细菌基因组DNA片段大、纯度高、质量稳定可靠，满足后续实验要求。

主权项

一种磁珠法提取细菌基因组DNA的试剂盒，其特征在于：其包括缓冲液A、缓冲液B、缓冲液C、磁珠悬浮液D、缓冲液E、缓冲液F、缓冲液G七种组分；所述缓冲液A终浓度组成为：20‑50mmol/L葡萄糖、10‑30mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、5‑20mmol/L乙二胺四乙酸，溶剂为高压灭菌水，缓冲液A终PH=8.0‑8.5；所述缓冲液B终浓度组成为：15‑25mg/ml蛋白酶K、1‑5mol/L盐酸胍、5‑25mmol/L柠檬酸钠、1‑2%曲拉通、0.5‑5mmol/L EDTA，溶剂为高压灭菌水，缓冲液B终PH=4.0‑5.5；所述缓冲液C成分组成为：无水乙醇溶液；所述缓冲液E终浓度组成为：1‑5mol/L醋酸钠，体积分数为20‑40%无水乙醇，溶剂为高压灭菌水，缓冲液E终PH=4.0‑5.5；所述缓冲液F终浓度组成为：10‑30mmol/L Tris‑HCl、0.5‑5mmol/L EDTA、5‑25mmol/L柠檬酸钠和0.3‑0.7 L/L的无水乙醇，溶剂为高压灭菌水 ，缓冲液F终PH=8.0‑8.5；所述缓冲液G终浓度组成为：10‑30mmol/L Tris‑HCl、0.5‑5mmol/L EDTA，溶剂为高压灭菌水，缓冲液G终PH=8.0‑8.5；所述磁珠悬浮液D成分组成为：每200mmol/L氯化钠水溶液中含有50mg单分散Fe3O4@SiO2‑AEAPS纳米磁珠；所述单分散Fe3O4@SiO2‑AEAPS纳米磁珠通过以下步骤制备得到：（1）溶剂热法制备单分散的四氧化三铁纳米球；（2）采用改进的Stöber法，在四氧化三铁纳米球外包覆二氧化硅，得到单分散的Fe3O4@SiO2纳米球，具体为：称取0.1g步骤（1）制备得到的四氧化三铁纳米球，向其中依次加入20ml去离子水、80ml无水乙醇和1ml质量分数为28%的氨水，超声混合均匀后向混合液中加入1ml正硅酸乙酯， 20°C下机械搅拌6小时；反应完毕后，将所得溶液离心，并依次用去离子水和乙醇清洗3次，制得单分散的二氧化硅包覆四氧化三铁纳米球，将所得产物在60°C烘箱中干燥待用；（3）使用硅烷偶联剂氨乙基氨丙基聚二甲基硅氧烷对步骤（2）获得的Fe3O4@SiO2进行硅烷化处理，得到Fe3O4@SiO2‑AEAPS；具体为：称取0.1g步骤（2）得到的Fe3O4@SiO2纳米球，加入到20ml二甲基甲酰胺中，超声分散后得到溶液A；将10ml的氨乙基氨丙基聚二甲基硅氧烷和20ml的二甲基甲酰胺混合均匀后，加入一定量的丁二酸酐使得混合溶液pH值维持在3.9~4.1，60°C下机械搅拌3小时，得到溶液B；将溶液A、B混合后加入20ml去离子水，在60°C下继续机械搅拌5小时后，将所得溶液离心，并依次用去离子水和乙醇清洗3次，制得单分散的硅烷化的二氧化硅包覆四氧化三铁纳米球Fe3O4@SiO2‑AEAPS。