[发明专利]一种叶酸标记的荧光二氧化硅包裹金纳米粒子的制备方法

摘要

本发明公开了一种叶酸标记的荧光二氧化硅包裹金纳米粒子(FA-AuNPs@SiO₂-TCPP)的制备方法，所述的方法为：制备<10nm的金纳米粒子；然后用stober法包裹二氧化硅层；荧光卟啉物与氨基硅源进行酰胺化反应，制得二氧化硅前驱体；包硅的金纳米粒子和二氧化硅前驱体按比例混合，加过量硅源，碱性环境下水解缩合，即得荧光二氧化硅包裹金纳米粒子；硅表面的氨基和叶酸的羧基反应制得叶酸标记的荧光二氧化硅包裹金纳米粒子(FA-AuNPs@SiO₂-TCPP)。本发明制备条件、步骤简单，制得的纳米粒子粒径小，单分散性和稳定性好，且毒副作用小，安全性高，荧光性能稳定，CT成像造影分辨率高，对肿瘤细胞具有靶向作用，是很好的荧光成像探针和CT造影剂。

主权项

一种叶酸标记的荧光二氧化硅层包覆金纳米粒子的制备方法，其特征在于包括下述步骤：步骤1，金纳米粒子(AuNPs)的制备步骤：步骤1.1，称取0.1mg柠檬酸钠，溶解在10ml去离子水中，得到1％的柠檬酸钠溶液；步骤1.2，取1％氯金酸溶液1mL，加入99mL去离子水，得到0.01％氯金酸溶液；步骤1.3，将0.01％氯金酸溶液煮沸，冷凝回流持续搅拌15分钟；一次性快速1％柠檬酸钠溶液3mL，继续反应30分钟，得到的是粒径约为18nm的AuNPs(C_Au＝0.0038g·L^‑1)。步骤2，TCPP前驱体的制备步骤：步骤2.1，TCPP溶解在有机溶剂中，浓度为3.75mM，然后加入EDC(15‑30mM)，静置20分钟后，加入NHS(15‑30mM)，活化TCPP的羧基；反应温度为室温；,步骤2.2，将APTES(15‑30mM)加入上述活化羧基后的TCPP混合液中，室温条件下避光搅拌24h；步骤2.3，将反应后的产物放入‑80℃冰箱过夜，然后在真空冷冻干燥机中冻干12‑24h，除去有机溶剂，得到粉末状的TCPP前驱体。步骤3，二氧化硅包覆金纳米粒子(AuNPs@SiO₂)的制备步骤：步骤3.1,配制1.68‑16.8g·L^‑1的PVP水溶液，超声振荡15分钟；步骤3.2,将PVP10溶液(0.65mL)与步骤1制得的金纳米粒子溶液(34.7mL)混合，室温下避光搅拌24h；离心上述反应物，收集沉淀物；步骤3.3,将离心后的沉淀重悬在乙醇氨水溶液(4.2vol.％氨水溶在乙醇中)中，使得金浓度为0.59g·L^‑1；步骤3.4,迅速将体积为100‑500μL的10vol.％TEOS乙醇溶液倒入上述混合液中，室温下剧烈搅拌12h；步骤3.5,产物用8000rpm转速离心10分钟，用无水乙醇洗去杂质，重复三次，得到二氧化硅包覆金纳米粒子(AuNPs@SiO₂)。步骤4，荧光二氧化硅层包覆金纳米粒子(AuNPs@SiO₂‑TCPP)的制备步骤：步骤4.1,将步骤3所得离心后的AuNPs@SiO₂重悬在氨水乙醇溶液(5mL无水乙醇，200μL氨水)；步骤4.2,向混合物中加入步骤2所得的TCPP前驱体，摩尔比为1：1，室温下剧烈搅拌；步骤4.3,加入TEOS(0.5‑2mM)和APTES(0.5‑2mM)，室温下避光剧烈搅拌24h；步骤4.4,将产物用5000‑10000rpm转速离心10分钟，用无水乙醇反复洗涤3次，最后重悬在去离子水中，即得到荧光二氧化硅层包覆金纳米粒子(AuNPs@SiO₂‑TCPP)。步骤5,叶酸标记的荧光二氧化硅层包覆的金纳米粒子(FA‑AuNPs@SiO₂‑TCPP)的制备过程：步骤5.1，将叶酸溶解在二甲基亚砜(DMSO)中，浓度为1.0‑3.0mM，超声振荡使其完全分散；步骤5.2，将EDC加入叶酸DMSO溶液中(摩尔比为1:1)，静置20min后，加入NHS(摩尔比为1:1)，室温条件下搅拌1h；步骤5.3，将步骤4所制得的荧光二氧化硅层包覆金纳米粒子(AuNPs@SiO₂‑TCPP)加入活化后的叶酸溶液中，室温搅拌3h；步骤5.4，离心收集反应产物，用PBS缓冲液洗涤三次，重悬在PBS缓冲液并放入4摄氏度冰箱保存，即得到叶酸标记的荧光二氧化硅层包覆的金纳米粒子(FA‑AuNPs@SiO₂‑TCPP)。