[发明专利]慢病毒载体介导PEDF在抑制肾细胞癌血行转移中的应用

摘要

慢病毒载体介导PEDF在抑制肾细胞癌血行转移中的应用属于生物技术领域，该方法构建了重组质粒pBobi-Luc及pBobi-PEDF-IRES-Luc以及将慢病毒包装、纯化，通过分子影像学技术，在体外和体内实时、动态、定量地观察慢病毒介导的PEDF基因抑制肾癌干细胞的增殖、促进其凋亡的过程，发现能够明显抑制肾细胞癌细胞的侵袭转移能力，并活体观测PEDF基因治疗肾细胞癌原位移植瘤的效果，本发明介导PEDF的重组慢病毒载体可能成为肾细胞癌基因治疗的有力工具。

主权项

慢病毒载体介导PEDF在抑制肾细胞癌血行转移中的应用，其特征在于：该方法主要步骤如下：(1)采用RT‑PCR扩增PEDF、IRES、Luc基因，测序并鉴定，将其导入质粒进行扩增；(2)采用Luciferase PCR产物以限制性内切酶BamHI/XhoI接入pBobi载体，得到pBobi‑Luc，构建pBobi‑Luc载体，对pBobi‑Luc(+)质粒进行扩增、提纯，鉴定；(3)采用PEDF PCR产物以限制性内切酶BamHI/XhoI接入pBobi载体，得到pBobi‑PEDF；Luciferase PCR产物以限制性内切酶BamHI/XhoI接入pcDNA3.1(+)，得到pN31‑Luc；IRES PCR产物以限制性内切酶BamHI/XhoI接入pN31‑Luc，得到pN31‑IL；以BamHI/XhoI酶切pN31‑IL，得到IRES‑Luc片段，接入XhoI单酶切的pBobi‑PEDF，构建pBobi‑PEDF‑IRES‑Luc载体，对pBobi‑PEDF‑IRES‑Luc(+)质粒进行扩增、提纯，鉴定；(4)分别对pBobi‑Luc及pBobi‑PEDF‑IRES‑Luc重组质粒进行包装，得到Lenti‑Luc病毒及Lenti‑PEDF‑Luc病毒。(5)将Lenti‑Luc病毒及Lenti‑PEDF‑Luc病毒导入进行裸鼠肾癌治疗试验和肾癌细胞试验。