[发明专利]一种应用于甲基结合蛋白测序中的甲基化DNA富集方法在审
| 申请号： | 201410394587.9 | 申请日： | 2014-08-12 |
| 公开（公告）号： | CN104152437A | 公开（公告）日： | 2014-11-19 |
| 发明（设计）人： | 孙子奎;高文学;丁方美;王锋;唐嘉婕 | 申请（专利权）人： | 上海派森诺生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 上海晨皓知识产权代理事务所(普通合伙) 31260 | 代理人： | 成丽杰 |
| 地址： | 200231 上海市徐汇*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及分子生物学领域，公开了一种应用于甲基结合蛋白测序中的甲基化DNA富集方法，包含以下步骤：(1)磁珠的活化与甲基结合蛋白交联反应；(2)甲基结合蛋白-磁珠复合物与片段化DNA的孵化；(3)去除非甲基化DNA；(4)甲基化DNA洗脱；(5)乙醇沉淀，得到富集的甲基化DNA。同现有技术相比，本发明在去除非甲基化DNA这步，依次采用160mM NaCl与200mM NaCl对片段化DNA与甲基结合蛋白-磁珠复合物的混合物进行洗脱，更完全地除去了非甲基化DNA，保留甲基化DNA，提高了最后富集到的DNA中甲基化DNA的比例，从而提高了甲基化区域的测序深度。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 应用于 甲基 结合 蛋白 中的 甲基化 dna 富集 方法 | ||
【主权项】：
一种应用于甲基结合蛋白测序中的甲基化DNA富集方法，采用甲基化DNA富集试剂盒进行，其特征在于，包含下述步骤：(1)磁珠的活化与甲基结合蛋白交联反应将磁珠进行活化，然后使生物素标记的甲基结合蛋白与活化后的磁珠发生交联反应，得到甲基结合蛋白‑磁珠复合物；(2)甲基结合蛋白‑磁珠复合物与片段化DNA的孵化将片段化DNA加入上述步骤(1)得到的甲基结合蛋白‑磁珠复合物中，进行孵化，使甲基化DNA与复合物进行特异性地结合；(3)去除非甲基化DNA对上述步骤(2)中经孵化的片段化DNA与甲基结合蛋白‑磁珠复合物的混合物，用160mM NaCl将磁珠洗脱4遍，再用200mM NaCl洗脱3遍，除去非甲基化DNA；(4)甲基化DNA洗脱对上述步骤(3)中得到的去除了非甲基化DNA的混合物，使用2000mMNaCl对磁珠进行洗脱，得到甲基化DNA组份；(5)乙醇沉淀采用乙醇沉淀法对上述步骤(4)中洗脱得到的甲基化DNA组份进行沉淀，干燥后以TE缓冲液溶解，即得到富集的甲基化DNA。
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