[发明专利]一种可视化鉴定美洲大蠊的方法及试剂盒

摘要

本发明公开一种可视化鉴定美洲大蠊的方法及试剂盒。本发明设计如SEQ ID NO.1所示的美洲大蠊的可视化探针序列，该探针的前缀序列和部分G-四联结构互补。本发明通过提取待检标本的基因组DNA，然后以LCO1490和HCO2198为引物对进行PCR反应，得到COI序列；再通过LCO1490和探针I为引物对，以COI序列为模板，进行PCR反应；向得到的可视化扩增产物中加入NaCl溶液，变性和复性；接着加入氯铁血红素反应，再加入H2O2和ABTS2-，观察颜色变化，颜色变为绿色，表示待检样品为美洲大蠊，颜色没有发生变化，表示待检样品非美洲大蠊。本发明的试剂盒包含前述可视化探针序列。

主权项

一种可视化鉴定美洲大蠊的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)设计美洲大蠊的可视化探针序列，如下：探针I，方向为5’‑3’：AACTTTATTACTAGCTAGTAGTATAGTAGAAAGAGGTGCCGGA其中，方框框住部分为前缀序列；与划横线部分序列反向互补，起到沉默空白的作用；粗体字部分为G‑四联结构；(2)模板DNA的提取：提取待检标本的基因组DNA；(3)COI序列的制备：以步骤(2)得到的基因组DNA为模板，以LCO1490和HCO2198为引物对进行PCR反应，再将PCR产物纯化，得到COI序列；LCO1490：5’‑GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG‑3’；HCO2198：5’‑TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA‑3’；(4)可视化扩增：以步骤(3)得到的COI序列为模板，以LCO1490和探针I为引物对进行PCR反应；(5)显色和结果判断：向步骤(4)得到的可视化扩增产物中加入NaCl溶液，变性和复性；接着加入氯铁血红素反应，再加入H2O2和ABTS2‑，观察颜色变化；颜色变为绿色，表示待检样品为美洲大蠊；颜色没有发生变化，表示待检样品非美洲大蠊。