[发明专利]一种鹿骨膜条件培养液的制备方法及应用

摘要

本发明公开了一种鹿骨膜条件培养液的制备方法及应用，属于细胞组织培养技术领域。本发明所提供的方法是将鹿骨膜组织切片后置于插入皿中，向插入皿中加入培养基培养，培养后收集培养液，过滤后获得条件培养液；所述插入皿由上室和下室组成，培养时插入皿放入多孔培养板中。本发明所提供的方法能够使鹿骨膜组织在离体培养条件下分泌活性物质，进而收集、分析所分泌的活性物质，解决了离体培养不能为组织提供立体的培养环境、培养过程中二氧化碳浓度很难控制以及不能随时收集条件培养液的难题，同时本发明的方法还有效提高培养组织的成活率，并缩短了组织的培养时间，且能够随时收集条件培养液。

主权项

一种鹿骨膜条件培养液的制备方法，其特征在于，步骤如下：1)利用动物组织切割器将活体采集的鹿骨膜组织切割成薄片，获得骨膜组织切片；所述骨膜组织切片，长2‑6mm，宽1.5‑2mm，厚0.2‑1.7mm；2)将步骤1)所得的10‑100片骨膜组织切片，放入用鼠尾胶原或I型胶原包被的插入皿中，再将插入皿放到多孔培养板的孔中；所述插入皿底部由0.4μm孔径的涤纶树脂制成，培养时放入多孔细胞培养板中，将培养空间分为上室和下室，上室和下室之间有培养液联通；3)向插入皿和培养板中加入液体培养液培养，培养完成后收集培养液；所述液体培养液为神经培养液，具体组成为：neurobasal medium加入2％的B27supplement再加1％的抗生素；所述培养，培养温度为37℃，CO2浓度为5％，饱和湿度，培养时间为2‑4d；4)用滤膜过滤步骤3)所得培养液，获得条件培养液。