[发明专利]一种可用于筛选生猪肠道高粘附能力微生态制剂的方法

摘要

一种可用于筛选生猪肠道高粘附能力微生态制剂的方法，是利用恒化器培养猪粪便，挑取粘附于恒化器瓶壁上的微生物，经鉴定后评价其对肠上皮细胞HT-29粘附能力的强弱和不同因素（温度、胆盐、PH等）对所筛选细菌生长的影响。本发明的优点是：直接以对恒化器瓶壁粘附能力作为筛细指标，针对性强。由于粘附能力是益生菌发挥作用的关键性指标，因此本发明可用于畜牧和人类微生态潜在菌株的筛选。 

主权项

一种可用于筛选生猪肠道高粘附能力微生态制剂的方法，其特征是:（1）样品的收集和保存：收集健康猪盲肠中的粪便和肠壁粘膜层物质，转人厌氧环境，加入甘油，其重量为粪便和甘油总重量的10％，旋涡振荡器混匀，‑8O ℃保存；（2）恒化器的组装和使用：将储料罐，发酵罐，废液罐，橡胶塞，硅胶管，装NaOH的玻璃瓶及通气过滤器按顺序连接起来，置于工作台上，连接混合气体，蠕动泵，pH调节器，磁力搅拌器，废气排除装置；（3）恒化器内培养基的制备：按加入成分占终产物质量百分比加入如下成分：5‰可溶性淀粉，3‰牛乳酪蛋白，3‰蛋白胨，0.6‰果胶，0.6‰木聚糖，0.6‰阿拉伯半乳聚糖，0.6‰支链淀粉，0.4‰半胱氨酸, 0.01‰血红素，0.25‰胆固醇，0.25‰鹅脱氧胆酸，0.25‰胆酸，2‰磷酸二氢钾，10‰磷酸氢二钾，4.5‰氯化钠，0.5‰七水硫酸镁，0.45‰二水氯化钙，培养基经高压灭菌后用蠕动泵泵入储料罐内；（4）待恒化器稳定后，在培养基中接种步骤（1）中得到的‑8O ℃保存的猪粪便样品或肠粘膜层，其重量为培养基和猪粪便或培养基和肠粘膜层总重量的10%，连续培养8‑16天后得到的的培养物即为健康人体肠道微生态系统；（5）刮取恒化器瓶壁上的物质，利用活菌技术方法分离微生物并鉴定；鉴定出的微生物利用细胞粘附试验和益生菌评价指标评价其益生效果。