[发明专利]一种适于香菇工厂化栽培菌种沪F2及其指纹图谱以及栽培方法

摘要

本发明涉及一种适于香菇工厂化栽培菌种沪F2及其指纹图谱以及栽培方法，该指纹图谱由4对SSR标记的特异等位片段组合而成。栽培方法包括：(1)初次培养；(2)二次培养恢复期；(3)二次培养转色期；(4)二次培养催蕾期。本发明可以解决香菇菌丝恢复缓慢、转色延迟、抗杂菌能力弱、原基发生需要较大温差刺激的技术难题，使香菇工厂化生产经济可行，长期运行可降低成本，提高香菇生产效益。

主权项

1.一种鉴定香菇工厂化栽培菌种沪F2的方法，其具体步骤如下：(1)菌丝培养：将香菇菌种转接到马铃薯葡萄糖培养基中，23℃～25℃下避光摇瓶培养，3d～4d后收集菌丝；(2)基因组DNA的提取：用CTAB法提取上述菌丝的基因组DNA，紫外分光光度法检测总基因组DNA浓度和纯度，调整样品DNA的浓度一致；(3)SSR分子标记的检测：对上述提取的DNA进行基因SSR标记的PCR扩增，PCR扩增体系：总体积20μL，包括：10×PCR buffer 2μL，25mmol/L MgCl₂ 2μL，10mmol/L dNTP 0.4μL，5U/μL Taq DNA酶0.2μL，10μmol/L SSR标记正向引物和反向引物总体积各1.5μL，浓度20ng～30ng/μL提取的模板DNA 2μL，ddH₂O 10.4μL；PCR反应条件：94℃5min；94℃30second，55℃30second，72℃30second，30个循环；72℃5min；(4)电泳检测，银染，显色，拍照，分析结果：采用4对SSR引物对香菇菌株进行PCR扩增，通过对照50bp DNA ladder可确定各SSR引物扩增的等位片段的数量和相对分子量，符合编号组合为：01(3+4)(1)的菌种，即可确定该菌种为香菇“沪F2”菌种；其中，所述4对SSR引物序列如下：Le_fp0004正向引物：CCCAAAAAGGATTTCAGCAA；反向引物：AACCGGAGTGGTGTAAGTGC；Le_fp0007正向引物：CATTGCTCGGATCCTTCATT；反向引物：TACCTCGTGCGGACTTTGAT；Le_fp0008正向引物：CTCTTTGCACCCTCAACCTC；反向引物：CAGCAGTCTCCTCTTGGCTC；Le_fp0009正向引物：AAGCAGGTCAGAGCAGGTTC；反向引物：ACCGAGAGCAGAGTCGAGAG；编号组合01(3+4)(1)的含义如下表所示：