[发明专利]一种提高AcMNPV多角体内部外源蛋白含量的方法

摘要

本发明公开了一种提高AcMNPV多角体内部外源蛋白含量的方法。利用苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒为载体，构建了表达E25融合绿色荧光蛋白(EGFP)的重组病毒。利用草地贪夜蛾细胞(Sf-9细胞)作为重组杆状病毒的宿主，将表达重组蛋白的病毒感染Sf-9细胞。重组病毒感染细胞96小时后收集多角体，荧光显微镜检测表明产生的多角体晶体能将重组蛋白包埋其中，随后Western blot检测表明多角体内部重组蛋白的包埋水平远高于对照。该技术有利于提高外源蛋白包埋入多角体内部的水平，为深度开发利用杆状病毒-昆虫表达系统提供了条件。

主权项

一种提高AcMNPV多角体内部外源蛋白含量的方法，其特征在于，利用PCR方法对e25基因和egfp基因进行克隆，通过琼脂糖凝胶电泳将egfp基因PCR产物经XbaI和HindIII酶切后克隆至pFastBacI载体，得到pFastBacI‑egfp，随后将e25基因经BamHI和XbaI酶切后PCR产物克隆入pFastBacI‑egfp，获得pFastBacI‑e25‑egfp，以pFastBacI‑egfp和pFastBacI‑e25‑egfp为模板，扩增多角体启动子pPH及egfp基因片段pPH‑egfp；然后将egfp基因片段克隆入杆状病毒转移载体得到重组的转移载体；将重组载体转染入细胞，使用Sf‑9培养细胞，通过离心收集培养；之后收集多角体及重组蛋白鉴定分析。